摘要：本研究利用定向进化的方法对疏绵状嗜热丝孢菌（Thermomyces?lanuginosus）脂肪酶LN进行分子改造。采用易错PCR方法，建立了含有12357个转化子的突变体库。以高活力为筛选压力，通过三丁酸甘油酯平板透明圈法、G418平板、小量发酵筛选和大量发酵测酶活，最后筛选出一株正向突变菌株，对此工程菌进行发酵，通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析等步骤纯化了突变蛋白并测定酶活，结果其酶活是野生菌株所产酶活力的3.4倍。对此突变基因进行测得的序列，并与野生基因比较，有4个碱基位点发生变化，其中两个位点引起氨基酸的变化，它们是A96V，Q132R。将这株定点突变工程菌株最终命名为GS-TA-LN4。
- 专利类型发明专利
- 申请人山东农业大学;
- 发明人李萌;郭晓红;李多川;
- 地址271018 山东省泰安市岱宗大街61号
- 申请号CN201310547209.5
- 申请时间2013年11月06日
- 申请公布号CN103555600A
- 申请公布时间2014年02月05日
- 分类号C12N1/19(2006.01)I;C12R1/84(2006.01)N;C12R1/645(2006.01)N;
