今日信息速递-用氯化铯离心法纯化噬菌体的操作方法
[器材和试剂]
● L8—M Beckman超速离心机或与其相当的机型
● 吊桶式SWTi4l转头或相当类型
● 氯化铯(Sigma)
● PBS
● 纯化的噬菌体样本
[方法]
1．在每毫升最后的噬菌体悬液(例如来自实验方案13．11)中，加入0．45 g氯化铯，充分混匀至溶解。
2．用吊桶◢式转头 (或与其相当的型号) 离心溶液，15℃17h，噬菌体将浓缩在组分1和组分2中(。组分1的浓度较高，但组分2的体积较大。用巴氏滴管或塑料注射器吸取这些组分。如果是第一次使用本实验方案，那么先收集所有条带并分别对其检测将是明智之举。
3．将收获∞的溶液对PBS透析过夜。
4．通过感染大肠杆菌DH5cF，或TGl滴定各个不同组分中噬菌体，并保存滴度最高的组分。通常，噬菌体会集中在1个区带内，而较少的数量会分散在其他区带(如果可见)。加入甘油至10％；按每◥份样本1013个噬菌体等量分装并储存于-80℃。更进一步的质量控制则可进行蛋白杂交印迹，采用抗标签抗体或抗pⅢ抗体。
用氯化铯纯化噬菌粒。
离心后离心管外观如图示。噬菌体主要浓缩于碎Ψ片样区带(组分1)和其下的乳白色区带(组分2)。两条区带均需收集
