蛋白质的制备是一项十分细致的工作。涉及物理学、化学和生物学的知识很广。高分子蛋白质具有一定的立体构象,相当不稳定,极易变性、变构,为得到天然状态的蛋白质,尽量采用温和的手段,如中性、低温、避免起泡等,还要注意防腐。
动物材料中的蛋白质有些可溶 的形式存在于体液(如血浆、消化硫等)中,可以不必经过提取直接进行分离。蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质,只需要适当的溶剂洗去可溶性的 伴随物,如脂类、糖类以及其他可溶性〓蛋白质,最后剩下的就是不溶性蛋白质。这些蛋白质经细胞破碎后,用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂,将蛋白质溶解出来, 再用离心法除去不溶物,即得粗提取液。
整¤个制备过程一般可分为5 个阶段:①材料的选择和预处理,②细胞的破∏碎(有时需进行细胞器的分离),③提取,④纯化(包括盐析,有机溶剂沉淀,有机溶剂提取、吸附、层析、超离心及 结晶等),⑤浓缩、干燥及保存。以上5 个阶段不是要求每个方案都完整地具备,也不是每▲一阶段截然分开。
不论是哪一阶段使用哪一种方法◥,均必须在操作中保持生物大分子结构的完整性。保存活性,防止变性及降解现象的发生。因空间结构主要依靠氢键、盐键和范德华力的存在,遇酸、遇碱、高温、剧烈的机械作用及强烈的辐射等均可导致活性丧失。(以上资料来↓自中国生命科学论坛)
细胞破碎方法有多种,比如机械法(如组织捣碎匀浆机、玻璃匀浆器)、物理法(反复冻融法、冷热交替法〓、超声波法、高压破碎),化学及生物化学法(加入有机溶剂、溶解酶或裂解酶、表面活性剂)等。