【基本原理】
Southern blot 是将电泳分离的DNA片段转移到一定的固相支持物上的过程。DNA分子用限制性内切酶酶切后，经琼◢脂糖凝胶电泳将所得的DNA片段按分子量大小分离，然后将含DNA 片段的琼脂糖凝胶变性，将变性的单链DNA经虹吸作用转移并固定于固相支持膜上。转移过程中，膜上DNA片段的相对位置保持不变。用标记的DNA 或RNA探针与靶DNA杂交,洗ξ去多余探针, 经放射性自显影或显色反应确定同源靶序列在膜々上的位置和丰度。
【器材】
1.硝酸↓纤维素膜或尼龙膜
2.烤箱
3.封口机等其他实验室常规仪器。
【试剂】
1.限制性核酸内切酶
2.变性液： 5mol/L NaOH 4ml (0.2mol/L)1mmol/L Tris-Cl(pH7. 6) 15ml (0.15mol/L)
3.中和液：lmol/L Tris-Cl(pH7.6) 10ml (0.1mol/L)
5mol/L NaCl 3ml
ddH2O 定容100ml
4.转移液(20×SSC)：3mol /L NaCl 、0.3mol/L 柠檬酸钠，pH7.0
5.平衡缓冲♂液： 1 mol/L Tris-Cl (pH9.5) 10ml (0.1mol/L)
5 mol/L NaCl 2ml (0.1mol/L )
1 mol/L MgCl2 5ml (50mmol/L )
6.预杂交液： 20×SSC 25 ml(5×)
10%SDS 0.2 ml(0.02%)
10%十◥二烷基肌酸钠1 ml(0.1%)
鲑精DNA 1g (1×)
中和液20 ml
ddH2O 定容100ml
7.杂交液(临用前配ζ 制)：
预杂交液50 ml
变性探针50μl
8.显色液：
NBT 135μl
BCIP 105μl
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平衡缓冲液30 ml
9.抗地高辛标记酶联抗体(抗体-Dig-Ap)
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