(一)转移印迹

　　1.转移前准备：将滤纸，硝酸纤维素膜(NC)剪成与胶同样大小，NC 膜浸入蒸馏水中10-20min 后浸入转移buffer 中平衡30min 。

　　2.凝胶平衡：将电泳后的SDS-PAGE胶板置于转移buffer 中平衡30-60min。

　　3.按图操作：逐层铺平，各层之间勿留有气泡和皱折。

　　4.开始转移，连接正负极，盖好盖子，接上电源，恒流0.8mA/cm，室温下转移1h，转移后的凝胶再用氨基黑10B染色液染色20min ，然后脱色检测转移效果。

　　(二)免疫染色

　　1.转移后的NC膜于5%脱脂奶粉中◥封闭，4℃过夜。

　　2.TBS洗膜1-2次，10min/次。

　　3.加HRP标记的抗体，室温1h 。

　　4.TBS洗3次，10min/次。

　　5.NC膜再转入DAB显色液中，置暗处反应，待显色反应达到最佳程度时，立即用三蒸水洗涤终止反应。

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