近年,随着基础医学、临床医学和实验技术的进展,止血与止血检验出出现了许多新的研究热点和新的发展趋势。
1. 由一般的筛选检验到新颖的检验诊断:由于血栓与止血的诊断须以有效实验为依据,因此,不断建立血栓与止血方法是提高血栓与止血诊断准确性的重要措施。我国在20世纪80年代以前,开展和应用的血栓与止血检验仅限于一般的筛选试验,如白陶土部分凝血活酶时间(KPTT)、血浆凝血♀酶原时间(PT)、纤维蛋白帮定量测定(Fg)、凝血酶时【间(TT)和硫酸鱼精蛋白副凝固试验(3P试验)等。20世纪80年代至今,逐年建立或更新了许多新的检验诊断项目,并已应用于临床,如血小板聚集试验(PAgT)β-血小板球蛋白(β-TG)和血小板第4因子(PF4)测定、血小板P-选择素(GMP-140)测定。凝血因子VⅢ和Ⅸ促凝活性(FⅧ:C、FⅨ:C)及其抗原含量(FⅧ:Ag、FⅨ:Ag)测定、凝血酶-抗凝血酶复∴合物(TAT)纤溶酶-抗纤溶酶复合物(PAP)测定等[1]。近处,又有一大批更新的检测方法问世,如血小板微¤颗粒(PMP)检测血小板-白细胞◤聚集体测定(PLAg)、可溶性血管内皮细胞蛋白C受体测定(Sepcr)、可溶性尿激酶受体(su-PAR)测定、凝血酶激活的纤溶抑制物测定(TAFI)、蛋白C Global试验、蛋白Z抗原测定(PZ)和血管性血友病因子裂解蛋白酶活性测定(vWF-cp)等[2]。
2. 由手工法检测到自动化仪器检测[3]:以前,几乎所有√的凝血检验(KPTT、PT、TT和Fg等)都采用手工法。众所周知,手工法存在着许多固有的缺点和难以避免的干扰因素,其检测结果的准确性和可信度较低。20世纪90年代以来,国外许多先ㄨ进的血栓与止血的检测仪器涌入我国市场,大※大地推动了我国血栓与止血检验诊断研究的发展和提高,例如,全(半)自动血液凝固分析仪、血浆(全血)血小板聚集仪、血小板◥功能分析仪、血液流变分析仪以及流式细胞仪等。这些仪器︼的共同特点是:(1)自动化:在同一仪器中,包括标本的自动识别、自动接受、自动离心、自动放置、自动检测;检测结果的自动记录、自动分析、自动报告,随后标本又可自动拆卸、仪器自动清洗等。(2)多功能:同一仪器中,可以采取物理化学、生物学、免疫学、干化学技术和超声分析等方法进行检测。(3)智能化:由于仪器具有多功能,故可自动打印和报告多项参数,仪器对所测项目达到→任意检测(walkway assay)的要求,同时仪器设有质量控制(QA)系统,可以确保检测结果〗的准确度。(4)可靠性:检测结果的可靠性体现在精密度(precision)和准确度(accurary)上,如自动血液凝固分析仪的批内CV值可低于3%,批间CV值中低于8%。
此外,由于各种自动化仪器者匹配了各种相应的高质量的试剂,因此,可以根据检测目↑的的不同,选用所需要的试剂。选择试剂的原则是:(1)按检测的重复性和灵敏度选择合理的试剂;(2)按仪器的性能不同选择】匹配的试剂;(3)使用商品试剂必须严格遵循试剂说明书,然而,在行动化仪】器上,使用商品化试剂,必须采用国际标准化、精密度高、准确度好的检测方法,这样才能得到理想的检测结果。
3. 由检测试验『的终点到检测试验的功能:众所周知,血液凝固的过程和纤维蛋白溶解过程都是动态发展的过程。例如,临床所用◎的传统的活化部分凝血活酶时间(APTT)是在受检血浆中加入部分活酶试剂,以纤维蛋白形成为终点,记录血浆⊙凝固所需的时间,它检没的只是血浆凝固终点这一单个的信息,但是它不能反映内源凝血系统血液凝固的动态演变过程,近年,法国梅里埃(bioMerieux)公司研制的MDA血液凝固分析仪[4]可以用以检测双相活化部分凝血活酶时间(biphasic APTT)。该仪器是〗联合应用光度计和分析软件记录血液凝固全过程的浊度变化,并且绘制出血液凝固过程中光率的波形变化图像,可以提供从凝血因子被激活到纤维蛋白聚集形成之前的凝血时间、凝血速度和凝血加速度等变化的多种量化信々息,以了解血液凝固全过程的动态变化。该仪器检测正常人APTT图形呈“乙”字形,其血浆凝ㄨ固之前波形平坦,用以检测疑诊@ DIC患者,可以出现异常的凝血透射波形,其血浆凝固之前,坡度呈现下降曲线[4]。从波形图可以看出,虽然正常人和DIC患者在APTT检测的时间上没有太大的区别,但是DIC时,患才体内形◣成Ca2+依赖的极低密度脂蛋白(VLDL)和C反应蛋白(CRP)的复合物,后者导致透光度的改变,应用双相APTT可以得到这一信息。Downey等[4]对747例患者用双相APTT诊断DIC。其灵敏度为97。6%,特异性为98。0%,阳性预测值为74。0%,阴性预测值为99。9%,且在DIC出现之前18h即可改变,可准确诊断DIC前期(pre-DIC),是一种较理想的检测方法。
4. 由检验的简单评估到系统评估:以往对一项检验的评估,仅能指出检验操作过≡程中注意事项,当今对↓建立和使用的检测诊断应作系统的评估(systematic review,SR),其目的是对检验的准确性得出全面、真实和可靠的科学结论。系统评估应包括:(1)对所建立和使用检验的技术质量评估:指待评估检验与参考方法或“金标准”方法作出比较,得出检验的灵敏度(