兔子肿瘤坏死因子αelisa实验原理
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔子肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。用纯化的兔子肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)再与HRP标记的肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下ζ 转化成 终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通ω过标准曲线计算样品中兔子肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度。
兔子肿瘤坏死因子αelisa实验原理
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品:360ng/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液█ | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 | 2-8℃保存 |
兔子肿瘤坏死因子αelisa实验原理操作步骤:
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被︽板上设标准品孔10孔,在 一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在 一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从 一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液「50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀↑后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从▆第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取『50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为240ng/L,160ng/L,80ng/L,40ng/L,20ng/L)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包〓被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品 终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动▼混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩◆洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满ㄨ洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除※外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入∮显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空◣白孔调零,450nm波长依序测量各卐孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。