建议：
1. 你可以看到，如果没有自动梯度仪，你必须每次分别测50～100个样品的OD再绘成曲线根据峰位置确定CMV所在的收集管。如果你有日立DGF—U，再加一个带流动的分光光度计和分部收集器（国产）就可以组成完全自动化的收集线。
2. 做试验前建议先看看我的文章（用户培训的19篇中第2，3，3a及18篇等。搞清楚后再做实验。
3. 以上推荐的方法用于初试，确定了CMV在CSCL，Surcrose，Percoll中的浮密度准确值后可用阶梯梯度进行容量较大的分离（过程简化）
4. 粗离：黄瓜花叶捣碎过滤后，高速离心机8x50ml转头，4，000rpm，5℃，20分，去沉淀，上清液浓缩后加缓冲液用于超离※。
方法：（黄瓜病叶匀浆粗病毒提取并浓缩后）
Ⅰ. CSCL自形成梯度
用▲平均密度近1.37的CSCL，（每毫升加0.5克），日立CP100MX离心机，P100AT2转头，6.5PA管，样品量0.5～1ml均匀混在 CSCL中，加满离☆心管， 78，000rpm ，离心6小时，20℃，加速9减速5。离心后CMV沉降在1.37附近，接近离◣心管中部，如果在DGF—U用上取法连接带流动池的分光光度计测OD，可得到沿管长分布的OD—管长度曲■线，1.37附近的峰就是CMV峰，透析∞后得纯CMV，CSCL可按下法回收↑。（见附件）如没有DGF—U（日立自动梯度仪），可用手工做，每管分成50～100管，分别测OD绘曲线图，确定CMV所在的收集①离心管。
Ⅱ. Percoll自形成梯度
CMV在Percoll中浮密度大约是1.06～1.065。先用二管ㄨ试验，P70AT转头，用初密度为1.06的等密度Percoll，［用2.5份Percoll 、7.5份0.25M Sucrose配成Percoll等渗液，每管总量36ml，即Percoll 9ml，进口分装的∞（sigma）0.25M 蔗糖27ml］，样品2ml混在Percoll梯度液中，100，000xg（31，500rpm），50分钟20℃，加速9，减速5
Ⅲ. CMV在蔗糖中浮密度我不确定，估计在1.15～1.20之间。您可以先制备一个1.05～1.25的密♂度梯度（先做1.05，1.10，1.15，1.20，1.25，计算容量，静置过夜即可成连续梯度）用P40ST转头，13mlPA管，梯度液约11ml，梯度形成后加样至距管口3mm，200，000xg（33，500rpm），5℃，离心1小时，加速7，减速5。离心后用上取法每↑管收集成50管，分别测OD，绘成OD—管数曲线，可找到CMV峰并确定它在哪个收集管中。
