总结蛋白质纯▅化方法有哪些_教ω　育装备采购网

　　分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分级、细分级三步。

　　1.前处理：分离纯化某种蛋白质，首先要把蛋白质从原来的╳组织或细胞中以溶解的状态释放出来并保持原来的天然状态(如果做不到呢?比如蛋白以包涵体形式存在)，不丢失生物活性。为此，动物材料应先提出结缔组织和脂肪组织，种子材料应先去壳甚至去种皮以免手单宁等物质的污染，油料种子最好先用低沸点(为什么呢)的有机溶剂如乙醚等脱脂。然后根据不同♂的情况，选择适当的方法，将组织和细胞破碎。动▲物组织和细胞可用电动捣碎机或匀浆机破碎或用超声波处理破碎。植物组织和细胞由于具有纤维素、半纤维素和果胶等物质组成的细胞壁，一般需要用石『英砂或玻璃粉和适当的提取液一起研磨的方法或用纤维素酶处理』也能达到目的。细菌细胞的破碎比较麻烦，因为整个细菌细胞壁的骨架实际上↓是一个借共价键连接而成的肽聚糖囊〓状大分子，非常坚韧。破碎细菌细胞壁的常用方法有超声波破碎，与砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理等。组织和细胞破碎后，选择适当的缓冲液把所要的蛋白提取出来。细胞碎片等不溶物用离心或过滤的方法除去。

　　如果所要的蛋白主要集中在某一∑细胞组分，如细胞核、染色体、核糖体或可溶性细胞质等∞，则可利用差速离心的方法将它们分开，收集该细胞组分作为下步纯化的材料。如果碰上所要蛋白是与细胞膜或膜质细胞器结合的」，则必须利用超声波或去污剂使膜结构解聚，然后用适当介质提取。

　　2. 粗分级分离：当蛋白质提←取液(有时还杂有核酸、多糖之类)获得后，选用一套适当的方法，将所要的蛋白与其他杂蛋白分离开来。一般这一步的分离用盐析、等电点沉淀卐和有机溶剂分级分离等方法。这些方●法的特点是简便、处理量大，既能除↑去大量杂质，又能浓缩蛋白溶液。有些蛋白提取液体积较大，又不适于用沉淀或△盐析法浓缩，则可采用超过滤、凝胶过滤、冷冻真空干燥或其他方法进行浓缩。

　　3.细分级分离：样品经〒粗分级分离以后，一般体积较小，杂蛋白〓大部分已被除去。进一步纯化，一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析ξ　等。必要时还可选择电泳∑　法，包括区带电☉泳、等电点聚焦等作为最后的纯化步骤。用于细分级分离的方法一般规模较小，但分◆辨率很高。

　　结晶是蛋白质分离纯化的最后步骤。尽管结晶过程并不能保证蛋白⊙一定是均一的，但是只有某种蛋白在溶液中数量上占有优势时才能形成结※晶。结晶过程本身也伴随着一定程度的纯化，而重结晶又可除去少量夹杂的∴蛋白。由于结晶过程中从未发现过变性蛋白，因此蛋白的结晶不∞仅是纯度的一个标志，也是断定制品处于天然状态的有力指标。

　　蛋白质分离纯↘化的方法：

　　一、根据分子大小不同①的纯化方法

　　1、透析和超过滤

　　2、密度梯度◥离心

　　3、凝胶过滤

　　二、利用溶解度差别的纯化方法

　　1、等电点沉淀和pH控制

　　2、蛋白质的盐析和盐溶

　　3、有机溶♀剂分级分离法

　　4、温度对蛋白质浓度的影响

　　三、根据电荷不同Ψ 的纯化方法

　　1、电泳