小鼠5-羟ω基吲哚乙酸(5-HIAA)Elisa试剂盒说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
0.4ng/L - 18ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中5-羟基吲☆哚乙酸(5-HIAA)含量。
实验原理
小鼠5-羟基吲哚乙○酸(5-HIAA)Elisa试剂盒说明书本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)水平。用纯化的
小鼠5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔☆中依次
加入5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)，再与HRP 标记的5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)抗体结合，形成
抗体-抗原-酶卐标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下
转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的5-羟基吲哚乙酸
(5-HIAA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸〓光度(OD 值)，通过标准♂曲线计算样
品中小鼠5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(32ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品】稀释液▃ 1.5ml×1 瓶
4 样品↘稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行♂，提取后应尽∏快进行实验。若不能
马上进『行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的※稀释：本试剂盒提▲供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
16ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品ぷ加入150μl 标准品稀释液
8ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号↓标准品加入150μl 标准品稀释液
4ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2.0ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
1.0ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包」被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释〓液40μl，
然后再加待测样品10μl(样品最◥终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封ξ 板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜█，弃去液体，甩干，每孔加满洗【涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混□匀，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止：每孔◇加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准︽物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出□ 标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代◣入方程式，计算出样品浓∩度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓※度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶▅析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤╳时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准√曲线，最好做①复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值
大于标准品孔第一孔的OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物→请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪▓读数为准.
8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存：;2-8℃。
2.有效期：6 个月小鼠5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)Elisa试剂盒说明书
