【试剂盒∩名称】

　　鲍鱼雌二醇(E2)定量检测试剂盒(ELISA)

　　【试剂盒╱用途】

　　定量检测鲍鱼血清、血浆及相关液体样本中雌二醇(E2)的含量。

　　【检测原理】

　　本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸∞附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被鲍鱼雌二醇(E2)抗体的透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根过●氧化物酶(HRP)催化下转化♂为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中鲍鱼雌二醇(E2)浓︻度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计】算样本中鲍鱼雌二醇(E2)含量。

　　【试剂盒组成】

　　1酶标包被板12孔×8条7显色剂A液6mL

　　2标准品：160pg/mL0.6mL8显色剂B液6mL

　　320倍浓缩々洗涤液25mL9终止液6mL

　　4标准品稀释液〇6mL10说明书1份

　　5样本稀释液6mL11封板膜2张

　　6酶标试剂6mL12密封袋1个

　　备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：160、80、40、20、10、5pg/mL

　　【需要而未提供的试剂和器材】

　　1、37℃恒温箱

　　2、标准规格酶标仪

　　3、精密移液器及一次性吸头

　　4、蒸馏水

　　5、一次性试管

　　6、吸水纸

　　【操作步骤】

　　1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡◥30分钟。

　　2、配液：用蒸馏→水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

　　3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标▓准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔▲中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白∮对照孔不加。

　　4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

　　5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗≡涤液，静置1min，甩去『洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明◥书操作洗板)。

　　6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

　　7、温育：重复4的操作。

　　8、洗板：重复5的操作。

　　9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，37℃避光显色15min。

　　10、终止：取出酶》标板，每孔加终止液50μL，终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。

　　11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。

　　12、计算：根据标准品的浓度及对应ξ的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根◢据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样∮品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

　　【样本要求】

　　1、样本不能含叠氮钠(NaN3)，因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。

　　2、标本采集后尽早进行提╳取，提取按相关文献进ξ　行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验ξ，可将标本∮放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

　　3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

　　【注意事项】

　　1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读♂数为准。

　　2、酶标包◥被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂◇保存。

　　3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

　　4、若显色过浅，可适当延长底★物温育时间。

　　5、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、样本稀╳释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰☉到微孔;不得重复使用封板膜。

　　6、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

　　7、底物B对光敏感，避免长时间↘暴露于光下。

　　【操作程序总∩结】

　　准备试剂，样品和标准品

　　加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

　　洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

　　洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

　　加入终↑止液

　　15分∑钟之内读OD值

　　计算

　　【检测范围】

　　5-160pg/mL

　　【规格】

　　96人份/盒

　　【贮藏】

　　2-8℃，避光防潮保存。

　　【有效期】

　　6个月