● 储存条件:
-20℃保存,开封后有效期12个月。
● 产品简介:
本产品包含2种多肽和4种低分子量蛋白质组成,可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。分子量范围为1.4kD-26.6kD,分子量大小为1.4kD,3.5kD,6.5kD,14.2kD,16.9kD,26.6kD。
● 使用说明:
1. 超低分子量多肽的蛋白电泳较常规的蛋白电泳更为复杂,请仔细参阅说明书后再进行操作。
2. 收到产品后,室温彻底融化混匀后,离心快甩将溶液收集到管底,根据需要适量分装,-20℃贮存,每次使用时取】一管使用。
3. 本产品已经含有了样品缓冲液,使用前取一管Marker样品室温彻底融化后,95℃预热5分钟即可上样电泳,用考马斯Ψ亮蓝G-250染色后可见6条蛋白带。一般说来,0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样10μl,其他规格∩梳子请适当调整上样量。
注:一次热处理后,未用尽样品-20℃保存;下次使用时只要室温完全融化混匀后即可上样,可以不用再加热处理。
4. 制胶:先配制分离胶,聚合后再配制浓缩胶。电泳时,80-100v跑30-60分钟左右,待指示前沿到达分离胶上沿时,把电压调至150-200v,至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要3-4个小时。注:如果电泳时间过短,染色时,指示前沿容易遮挡1.4kD和3.5kD条带。
5. 如果关心较小的多肽(小于5KD),电泳之后可将胶置于固定液中固定30分钟,再进行染色,能得到较好的蛋白条带;如果不固定直接染色,小蛋白会不清楚。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液(目录号:RTD6201),该产品具有染色快,无毒,灵敏〒性高等特点,在小肽的染色中有更大的优势,是常规染色液的理想替代品。
6. 当用配方7进行染色时,由于超低分子量多肽极易从凝胶中浸出,因此染色时间不要太长,染色一般要1个小时左右(最多不要超过1.5小时)。
● 附:小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制
1. 40%PAA(29:1)(配制浓缩胶) 丙稀酰胺 38.67 g 甲叉双丙稀酰胺 1.33 g 用ddH2O溶解后定容至100 ml,过滤后使用。 贮存:4℃ |
2. 40% PAA(19:1) (配制分离胶) 丙稀酰胺 38 g 甲叉双丙稀酰胺 2 g 用ddH2O溶解后定容至100 ml,过滤后使用。 贮存:4℃ |
3. 凝胶缓冲液(配制凝胶用) [3M Tris; 0.3% SDS; pH8.45] Tris碱 182g ddH2O 300ml 1.5 g SDS或15ml 10% SDS 用HCl调pH值至8.45 用ddH2O定容至500ml 贮存:4℃ |
4. 10×阳极缓冲液(下槽缓冲液) [1M Tris pH8.9] Tris碱 121.1g ddH2O 400ml 用HCl调pH值至8.9 用ddH2O定容至500ml 贮存:4℃ 注:使用前稀╱释成1×阳极缓冲液使用。 |
5. 10×阴极缓冲液(上槽缓冲液) [1M Tris; 1M Tricine ;1% SDS; pH 8.25] Tris碱 121.14 g Tricine 179.2 g SDS 10g 用ddH2O溶解, 用HCl调节pH至8.25,定容至1000ml。 贮存:4℃ 注:使用前稀释成1×阴极缓冲液使用 |
6. 固定液 5% 戊二醛溶液 注:此溶液现用现配。 |
7. 染色液 冰醋酸 100ml 考马斯亮蓝G-250 0.25g 水 900ml |
8. 脱色液 冰醋酸 100ml 水 900ml
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9. 2×Tricine蛋白样品上样缓冲液(10ml) 1ml 1M Tris-Cl pH6.8 2.4ml 甘油 0.8g SDS 0.31g DTT(或者400μl β-巯基乙醇) 2mg 考马斯亮蓝G-250 用灭菌ddH2O定容至10ml 混匀分装-20℃贮存备用 |
超低分子量蛋白Marker凝胶的配制方法:
(一块0.75mm mini胶用量)
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分离胶 |
浓缩胶 |
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18%T, 5%C /6.0 ml |
5%T, 3.3%C/4 ml |
40% PAA(19:1) |
2.7 ml |
/ |
40% PAA (29:1) |
/ |
0.5 ml |
凝胶缓冲液 |
1.5 ml |
1 ml |
乙二醇(电泳级) |
1.8 ml |
/ |
ddH2O |
/ |
2.5 ml |
10%APS |
45 μl |
30 μl |
TEMED |
9 μl |
6 μl |