1、储存条件：-70 ℃ 保存，避免反复冻融
2、产品介绍：大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞是经特殊工艺制备的，适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac系统中同源重组的菌株，用于产生重组Bacmid。使用pUC19 质粒检测，转化效率可达107CFU/ug，-70°C 保存几个月转化效率不发生改变。DH10Bac菌株的基因型为：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG /pMON14272 / pMON7124
3、 产品特点：DH10Bac 细胞包含亲本Bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124. 亲本Bacmid 包含一个mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和lac Zα-互补因子。辅助质粒包含tns ABCD 区域，该区域提供了mini-Tn7从供体质粒插卐入亲本Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如pFastBac 系列质粒（pFastBac1，pFastBacDual等）含有Tn7R 和Tn7L 同源重组臂，Tn7R 和Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位↙点和SV40 病毒的PolyA 加尾信号。当含有靶基因pFastBac 的重组质粒转化到DH10Bac 细胞后，发生重⌒组后就可产生重组Bacmid，提取纯化重组Bacmid 转染昆虫细胞Sf9 或Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外，DH10Bac 细胞中的The φ80dlacZDM15 基因的产物可以实现β-半乳㊣ 糖苷酶的α-互补现象，用于重组bacmid 的蓝白斑筛选。
4、 操作步骤（以下操作均按无菌条件的标准进行）：提示
感受态细胞应保存在－70℃ ，不可多次冻融和放置时间↓过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。
制备含下面抗生素的LB 固体平板：50 μg/ml kanamycin、7 μg/ml gentamicin、10 μg/ml tetracycline、100 μg/ml X-gal、40 μg/ml IPTG。
（1） 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的①离心管中，置于冰浴中。
一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际☉情况分装使用。应注意所用DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的Ψ十分之一。以下实验以100μl 感受∴态细胞为例。
（2） 向感受态细胞悬液中加入1-10ng 重组质粒，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在〖冰浴中静置30 分钟。
（3）将离心管置于 42 ℃ 水浴中放置 90 秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷∩却 2 分钟，该过程不要摇动离心管。
（4） 向每个离心管中加入900μl无菌的SOC（不含抗生素），混匀后置于37 ℃ 200rpm，摇床振☆荡培养4 小时。
（5）用SOC 培养基进行10 倍梯度稀释，如分成3 个稀ζ释梯度10-1, 10-2, 10-3
（6） 取100ul 的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的〖液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养24-48 小时。
（7）保留剩余的菌液于4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。
相关试剂及培养基的制备方法
（1）SOB 和SOC 培养基：称取20g Tryptone ，5g Yeast Extract ，0.5g NaCl 置于1L 烧杯中加入约800ml 的去离子水，完全溶解后再补加10ml 250 mM KCl 溶液，滴加5M NaOH（约0.2ml）调pH 值7.0。 加入去
离子水将培养基※定容至1L。121 灭菌20min。使用时加入5ml 灭菌的2M MgCl2 溶液（此种培养基称为
SOB）。再补加经0.22um 过∏滤除菌的1M 葡萄糖溶液2ml（此种培养【基为SOC）。
（2） 转化复苏细菌用的液体SOC 培养基：可以一次高压50ml 液体」培养基，无菌状态按1ml 每管分装于高压◤灭菌的1.5ml 离心管中，装于自封袋中，冻存于-20℃中，每次用一支。可以极大地避免培养基污染和减少
劳动量。
（3） LB 固体选择培养基：100ml LB 液体培养基中加入1.5 g 琼脂粉，摇匀后，121℃高压灭菌20 分钟。冷却至50℃左右时加入相应浓度的抗生ω素（如AMP 浓度通常为100ug/ml），混匀后倒ㄨ在细菌用的无菌培养皿中，等琼脂凝固后即可使用。
（4）IPTG：称量1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于40 ml 灭菌水，浓度为200mmol/L。用无菌0.22 μm过滤膜过滤除菌。小份分装后，-20℃保存。
（5）X-gal：用DMF（二甲基甲酰胺）配制成20 mg/ml，小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。
