网络购彩

  • <tr id='KHA3nX'><strong id='KHA3nX'></strong><small id='KHA3nX'></small><button id='KHA3nX'></button><li id='KHA3nX'><noscript id='KHA3nX'><big id='KHA3nX'></big><dt id='KHA3nX'></dt></noscript></li></tr><ol id='KHA3nX'><option id='KHA3nX'><table id='KHA3nX'><blockquote id='KHA3nX'><tbody id='KHA3nX'></tbody></blockquote></table></option></ol><u id='KHA3nX'></u><kbd id='KHA3nX'><kbd id='KHA3nX'></kbd></kbd>

    <code id='KHA3nX'><strong id='KHA3nX'></strong></code>

    <fieldset id='KHA3nX'></fieldset>
          <span id='KHA3nX'></span>

              <ins id='KHA3nX'></ins>
              <acronym id='KHA3nX'><em id='KHA3nX'></em><td id='KHA3nX'><div id='KHA3nX'></div></td></acronym><address id='KHA3nX'><big id='KHA3nX'><big id='KHA3nX'></big><legend id='KHA3nX'></legend></big></address>

              <i id='KHA3nX'><div id='KHA3nX'><ins id='KHA3nX'></ins></div></i>
              <i id='KHA3nX'></i>
            1. <dl id='KHA3nX'></dl>
              1. <blockquote id='KHA3nX'><q id='KHA3nX'><noscript id='KHA3nX'></noscript><dt id='KHA3nX'></dt></q></blockquote><noframes id='KHA3nX'><i id='KHA3nX'></i>
                教育☆装备采购网
                第六届图书馆论坛580*60

                琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方♂法和技术

                教育装备采购※网 2017-03-10 14:58 围观1797次

                  [目的要求]

                  通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技▅术

                  [实验原理]

                  琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶㊣ 中泳动时有电荷效应和分子筛效应,DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极方向移动。不同浓度琼脂★糖凝胶可以分离从200bp至50kb的DNA片段。在琼▓脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭(ethidum bromide ,EB),在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带,在电场中,pH8.0条件下,凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。

                  琼脂糖凝胶有如下特点:

                  (1)DNA的分子大小在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数目的常用对数值成反比,分ξ子越大迁移得越慢。

                  (2)琼脂糖浓度 一个特定大小的线形DNA分子,其迁〓移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度(t)成线性关系。

                  (3)电压 低电压时,线状DNA片段迁移速率与所加∏电压成正比。但是随着电场强度的增加,不同分子量DNA片☉段的迁移率将以不同的幅度增长,随着电压的¤增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大,所加电压不得超过5v/cm。

                  (4)电泳温度 DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时的温度影响不明显,不同大小的DNA片段其相对迁移Ψ速率在4℃与30℃之间不发◤生明显改变,但浓度低于0.5%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱,最好在4℃条件下电∴泳。

                  (5)嵌入染料 荧光染料溴化乙锭用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强△,还会使线状迁移率降低15%。

                  (6)离子强度 电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA电泳迁移率。在没有▓离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶,电导率最小,DNA几乎不移动,在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化。

                  对于天「然的双链,常用的几种电泳缓冲液有TAE、TBE等,一般配制成浓缩母液,室温保存,用时稀释。

                  [实验仪器与设备]

                  1. 恒温培养箱 2. 琼脂糖凝※胶电泳系统

                  3. 高压灭菌锅 4. 紫外线透射仪

                  [实验材料]

                  1.三羟甲基氨基甲烷(Tris) 2.硼酸

                  3.乙二胺四乙酸(EDTA) 4.溴酚蓝

                  5.蔗糖 6.琼脂糖

                  7.溴化乙锭 8.DNA marker

                  9.DNA样品

                  [实验步骤]

                  1.缓冲液的【配制

                  5×TBE(5倍体积的TBE贮存液)

                  配1000ml 5×TBE:

                  Tris 54g

                  硼酸 27.5g

                  0.5mol/l EDTA 20ml

                  Ph8.0

                  凝胶加样缓冲液(6×)

                  溴酚蓝 0.25%

                  蔗糖 40%

                  ③溴化乙锭溶液(EB) 0.5μg/ml

                  2.制备琼脂糖凝胶▅

                  按照被分离→DNA的大小,决定凝胶中琼脂糖的百分含量。可参照下表:

                  琼脂糖凝胶浓度 线性DNA的有效分离范围

                  0.3% 5-60 kb

                  0.6% 1-20 kb

                  0.7% 0.8-10 kb

                  0.9% 0.5-7 kb

                  1.2% 0.4-6 kb

                  1.5% 0.2-4 kb

                  2.0% 0.1-3 kb

                  3.胶板的制备

                  (1) 用高压灭菌指示纸带将洗静、干燥的玻璃板的边ζ缘(或电◇泳装置所皿备的塑料盘的开口)封住,形成一个胶膜(将胶膜放在工作台的水平位置上,用水平仪校正)。

                  (2) 配制足够用于灌满电泳槽和制备凝胶所需的电泳缓冲液(1×TBE)。准确称量的琼脂糖粉。缓冲液不卐宜超过锥瓶或玻璃瓶的50%容量。 在电泳槽和凝胶中务必使用同一批次的电泳缓冲液,离子强度或pH值的微小差异会在凝胶中形成前沿,从而大大ω 影响DNA片段的迁移率 。

                  (3) 在锥瓶的瓶颈上松松地包上一层厚纸。如用玻璃瓶,瓶盖须拧松。在沸水浴或微波炉中将悬浮加热至琼脂糖溶解。注意:琼脂糖溶液若在微波炉里加热过长时间,溶液将』过热并暴沸。应核对溶液的体积在煮沸过程中是否由于蒸发而减少,必要时用缓冲液补充。

                  (4) 使溶液冷却至60℃。加入溴化乙锭(用水配制成10mg/ml的贮存液)到终浓度为0.5ug/ml,充分混匀。

                  (5) 用移液器吸取少量琼脂糖溶液⊙封固胶模边缘,凝固后,在距离底板0.5-10mm的位置上放置梳子,以便加入︾琼脂糖后可以形成完好的加样孔。如果梳子距玻璃板太□近,则拔出梳子时孔底将有破裂的危险,破裂后会使样品从玻璃板之间渗透。

                  (6)将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶模中。凝胶的厚度在3-5mm之间。检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡。

                  (7)在凝胶完全凝固后(于室温放置30-45分钟) ,小心移去梳子ㄨ和高压灭菌纸带,将凝胶放入电泳槽中。

                  低熔点琼脂糖凝胶及浓度低于0.5%的琼脂糖凝胶应冷却至4℃,并在冷库中电泳。

                  (8)加入恰好没过胶面约1mm深的足量电泳缓冲液。

                  4.加样

                  DNA样品与所需加♀样缓冲液混合后,用微量移液器,慢慢将混合物加至样品槽中。此时凝胶已浸没在缓冲液中。 一个加样孔的最大加样量依据DNA的数量及大小而▆定,一般为20-30μl样品。

                  已知大小的DNA标准,应同时加在凝胶的左凝胶的左侧和右侧孔内。确定未知DNA的大小。测量未知DNA的大小时,要所有样品都用相同的样品缓冲液。

                  5.电泳

                  在低电压条件下,线形DNA片段的迁移速度与电压成比例关系,但是,在电场增加时,不同相对分△子质量的DNA片段泳动度的↓增加是有差别的。因此,随着电压的增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围随之减小。为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率,电场强度不应高于5V/cm。当溴酚蓝指示剂移到到距离胶板下沿约1-2cm处,停止电泳。

                  上海创赛科技性能卓越,白〗介素细胞因子,胎牛血清,电泳设备科学仪器,原料药标准品,化学试剂,细胞培养耗材,上海创赛,海量产品№特价促销中,欢迎』来电咨询!

                点击进入上海创赛科技有限公司展台查看更多 来源:教育装备采购▽网 作者:上海创赛科技有限公司 责任编辑:黄磊 我要投稿
                普【教会专题840*100

                相关阅读

                • 血清蛋白琼脂糖凝胶电泳原理
                  教育装备采购网11-18
                  琼脂糖(agarose)是经过挑选,以质地较纯的琼脂(agar)作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖,它具有离子交换性质,这种性质会给电泳...
                • 血清蛋白琼脂糖凝胶电泳实验操作方法
                  教育装备采购网11-18
                  【试剂】1、苏丹黑染色液将苏丹黑B加到无水乙醇中至饱和,摇荡使乙酰化。用前过滤。上海创赛科技提供4197-25-5,苏丹黑B,GR,商品编号:D16-1032969-100G,价格431元。2、巴比妥缓冲液称取巴比...
                • DNA琼脂糖凝胶电泳实验原理和方法步骤
                  教育装备采购网09-14
                  一、实验目的学习和︻掌握琼脂糖电泳法鉴定DNA的原理和方法。二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖,具亲水性,但不带电荷,是一...
                • 琼脂糖凝胶电泳检测DNA的『方法和技术
                  上海创赛科技有限公司04-07
                  琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖▲凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应,DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上...
                • 电泳技术 琼脂糖凝胶电泳技术
                  卡迈舒(上海)生物科⊙技有限公司01-07
                  一、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和...
                • DNA的琼脂糖凝胶电泳
                  上海创赛科学仪器有限公①司11-24
                  一、原理DNA在碱性的溶液中带↘有负电荷,因此,在电场作用下朝正极移动。在琼脂糖凝胶中电泳时,由ㄨ于琼脂糖凝胶具有一定孔径,长度不同的DNA分子由于所受凝胶的阻遏作用大小不一,迁移的速度不同...
                • 琼脂糖凝胶电泳操作流程及注意事项
                  卡迈舒(上海)生▂物科技有限公司09-28
                  琼脂糖核酸电泳实验操作流程1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗】干净,放在制胶平◥板上,封闭模具边缘,架好梳子;2.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶:准确称量琼脂糖干粉...
                • 琼脂糖凝胶电泳实验
                  上海创赛科学仪○器有限公司07-17
                  【实验目的】(1)学习琼脂♀糖凝胶电泳的基本原理;(2)掌握使用水平式电泳仪的方法;(3)学习在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳的方法。【实验原理】琼脂糖凝胶电泳是基◥因工程实验室中分离鉴定核...

                版权与免责声明:

                ① 凡本网注明"来源:教育装备采购网"的所有作品,版权均属于教育装备采购网,未经本〗网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用。已获本网授权的作品,应在授权范围内使用,并注明"来源:教育装备采购网"。违者本网将追究相关法律责任。

                ② 本网凡注明"来源:XXX(非本网)"的作品,均转载自其它媒体,转载目¤的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对∞其真实性负责,且不承担此类作品侵权行为的直接责任⌒ 及连带责任。如其他媒体√、网站或个人从本网下载使用,必须保留本网注明的"稿件来源",并自负版权等法律责任。

                ③ 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起两周内与本网联系,否则视为放弃相关权■利。

                2022云展会300*245