一、实验目的
学习和掌握琼脂糖电泳法鉴定DNA的原理和方法。
二、实验原理
琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷，是一种很好的电泳∮支持物。DNA在碱性条件下（pH8.0的缓冲液）带负电荷，在电场中通过凝胶介质向正极移动，不同DNA分子片段由于分子和构︼型不同，在电场中的泳动速率液不同。溴化乙锭（EB）可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物，经紫外线照射后，可◥分出不同的区带，达到分离、鉴定分子量，筛选重组子的目的。上海创赛科技↑提供1239-45-8，溴化乙锭(EB)，BR 进分99%,商品编号：D16-1013683-1g，价格518元。
三、实验材料
实验14提取的DNA样品，
四、器具及药品
电泳仪，电泳槽，紫外透射反射仪，恒温水浴锅，微波炉，微量进样器，三羟甲基氨基甲烷，盐酸，醋酸钠，EDTA，琼脂糖，溴酚蓝，溴化乙锭。上海创赛〓科技提供77-86-1,三羟甲基氨基甲烷,Tris>99%,分子生物学级 ，商品编号：C84-3739-100g，价格65元。
五、实验步骤
1、安装电泳槽
将有机玻璃的电泳凝胶床洗净，晾干，用胶带将两端的开口封好，放在水平的工作台上，插上∩样品梳。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，（按0.3-1.5%的↑琼脂糖含量，1-25kb大小的DNA用1%的凝胶，20-100kb的DNA用0.5%的凝胶，200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶）置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化（不要加热至沸腾），取出摇匀。上◥海创赛科技提供9012-36-6,琼脂糖 ITM，Agarose ITM，Gel Strength(1.5% gel)>1,200 g/cm2 ,商品编号：C84-2678-5G，价格93元。
3、灌胶
将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
4、待琼脂糖胶凝固后，在电泳槽内☆加入电泳缓冲液，然后拔出梳子。
5、加样
将DNA样品与加样缓冲液按4：1混匀后，用微量移液器将混合液加到样品槽♂中，每槽加10-20μl，记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳
安装好电极导线，点样孔一端接负极，另一端接正极，打开电源，调电压至3-5V/cm，电泳1-3hr，当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时，停止电泳。上海创赛科技提供JY-JX5快速SSR电泳槽，电泳仪，商品编号：C71-JY-JX5-台，价格1176元。
7、染色和观察
取出凝胶，放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min，即可在254nm的紫外灯下观察，有橙红色荧光条带的位置，即为DNA条带，或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致癌剂，操作◆时要小心，必须戴手套。上海创赛科技提供UV-Ⅱ手提↙紫外灯，紫外分析仪，商品编号：C71-UV-Ⅱ-台，价格1050元。
CANSPEC品质提供的性能卓越，其优秀的品质满足您不同实验的多种需求，现货，产品详情，科学仪器，实验室√耗材，上海创赛,海量产品特价促销中，欢迎来电咨询！
