回收试剂盒的原理是在特↙定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质(一般是硅胶膜)上,洗涤去除杂质〒后,通过改变溶液环境使DNA溶解到纯水或TE(低盐、高pH)中进行洗脱,可去除PCR反应中的dNTPs、引物、矿物油和聚合酶等及DNA样本中的其它杂质,得到的DNA片段可用于酶切、连接、测序、PCR反应模版等后续操作。
目前的回收试剂盒主要有离心柱型和磁珠型两种,离心柱型主要是通过将硅胶膜固定在离心管中,让含有核酸的溶液用离心力或者负压让液体通过硅胶膜,使☆核酸在特定溶液环境中吸附在硅胶膜上,经过洗涤、洗脱等步骤得到纯的核酸。目前』大多数的生物试剂公司生产的回收试剂盒主要是采用该方法来回收核酸,这种方法操作简单、时间短。目前也有很多公司采用磁珠法来提取,不需要离心,可以用于自动化操作。
回收试剂盒可以从琼脂糖↘凝胶(TAE、TBE)、聚丙烯酰胺凝胶或酶切、PCR等产物中回收DNA片段,根据DNAP片段来源,按照DNA来源上可以分为PCR纯化回☉收试剂盒、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒和聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒这三类。如果片段大∏小在50bp-50kb之间,且片段单一,可以采用 PCR纯化回收试剂盒,可以节约跑电泳的时间以及紫外对DNA的破坏,如果片段不是单一条带,可以采取琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,可以切取单一的条带来进行DNA片段的回收Ψ←。如果需要回收片段更小的DNA片段,可以使用聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试》剂盒来进行。