ELISA的主要试剂为固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。以下叙述这些试剂的原料和制备方法。
一、固相载体
可作ELISA中载体的物质很多，最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后保留原来的免疫活性。聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式。在ELISA测定过程中，它作为载体和容器，不参与化学反应。加之它的价格低廉，所以被☆普遍采用。
ELISA载体的形状主要有三种：小试管、小珠和微量反应板。小试管的特点是还能兼作反应的容器，最后放入分光光度计中比色。小珠一般为直径0.6cm的圆球，表面〗经磨砂处理后吸附面积大增加。如用特♀殊的洗涤器，在洗涤过程中使圆珠滚动淋洗，效果更好。最常用的载体为微量反应板，专用于ELISA测定的产品也称为ELISA板，国际通用〗的标准板形是8×12的96孔式。为便于作少量标本的检测，有制成8联或12联孔条的，放入座架¤后，大小与标准ELISA板相同。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特定的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量反应︼板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤♂，对操作的标准化极为有利。
良好的ELISA板应该是吸附▆性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间和同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差■异很大。因此每一批号的聚苯乙烯制品在使》用前须检查其性能。常用的检查方法为：以一定浓度的人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA板各孔后，每孔内加入适当稀释的ぷ酶标抗人IgG抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底ㄨ物显色，终止酶反应后分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件，使各读数在0.8左右。计算所有读数的平均值。所有单个读数与平均读数▅之差应小于10%。与聚苯乙烯类似的塑】料为聚氯乙烯。作为ELISA固相载体，聚氯乙烯板的特点为★质软板薄，可切割，价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板№。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有时也略高。
为比较不同固相在某一ELISA测定♂中的优劣，可用以」下方法加以检验：用其它免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和一个典型的阴性标本。将它们分别进行一系列稀释后，在不同的固◤相载体上按预定的ELISA操作步骤进行测定，然后比较测定结果→。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果判』别最大，这种载体就是这一ELISA测定的最合适的固相载▓体。
除塑→料制品外，固相酶免■疫测定的载体还有两种材料：一是微孔滤膜，如硝酸纤¤维素膜、尼龙膜等。另一种载体是以含铁的磁性微粒制作的，反应时固相微粒悬浮在溶液中，具有液相反应的速率，反应结束后用磁铁吸引作为分离的手段，洗涤也十分方□便，但需配备特殊的仪器。
二、抗原和抗体△
在ELISA实施过程中，抗原和抗体的质量是实验是否成︻功的关键因素。本法要求所用抗々原纯度高，抗体效价高、亲和力强。
ELISA所用抗原有三个来〓源：天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于动物组织或体液、微生物培养物︽等，一般含有多种□ 抗原成分，需经纯化，提取出特定的抗原成分后才可应用，因此◥也称提纯抗原(purifiedantigen)。重组抗原(recombinantantigen)和多肽抗原(peptideantigen)均为人工合成品，使用安全，而且纯度高，干扰♀物质少。因此虽然制备合成◣抗原有较高的技术难度且要求较为昂贵的仪器设备和试剂，其应用仍十分普遍，特别是对那些天然抗原不易得到的试验，更显出其独●到之处。
用于ELISA的抗体有多克隆的和单克隆的。抗血∮清成分复杂，应从中提取IgG才可用于包被▲固相或酶标记。含单克隆抗体的小鼠腹水中的特异性抗体含量较高，有时可适当稀释后◣直接进行包被。制备酶结¤合物用的抗体的质量往往要求有较高的纯度。经硫酸铵盐析纯ㄨ化的IgG可进一步用各种分子筛层析提纯。也可用亲和层析法提纯特异性IgG，如用酶消化∮IgG后提取的Fab片段，则效果更好。
三、免疫吸附『剂
固相的抗原或抗体称为免疫↓吸附剂。将抗原或抗体固相化的过程称◣为包被(coating)。由于载体的不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板为载体，通常将抗原或抗体溶于№缓冲液(最常用的为pH9.6的碳酸缓冲液)中，加于ELISA板孔中在4℃过夜，经清洗后即可应用。如果包被液中的蛋白质浓度过低，固相载№体表面有能被此蛋白质完全覆盖，其后加入的血清标本和酶结▓合物中的蛋白质也会部分地吸附于固相载体表面，最后产生非特异↓性显色而导致本底偏高。在这种情况下，如在包被后再用1%～5%牛血清白蛋╱白包被一次，可以」消除这种干扰。这一过程▼称为封闭(blocking)。包被好的ELISA板在低温可放置一段时间而不失去其免疫〇活性。
四、酶和底物
ELISA中所用的酶要求纯度高、催化反应的转化↘率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、价格不贵、制备成的酶标抗体或抗原性质稳定，继续保留着它的活性部分和催化能力。最好在受检标本中不存在与标记酶相同的酶。另外它的相应底◇物应易于制备和保存，价格低廉，有色产物●易于测定，光吸收高。ELISA中最常用的酶为辣根过氧化酶(HRP)和从牛肠粘膜或大肠杆菌提↑取的碱性磷酸酶(AP)。
