一般来说作直线回归的话,每次检测的R2最好达到0.98,即R达到0.99,否则需要复测。
如果需要做几次检侧,那么每次的斜率和截距相差不要超过百分之20,R是相关系数,x与y的相关性。一般用R2表示,更加精确。R2不是说是独立的,其值越接近1说明其相关性越大。但是,一般的 R2不能达到这个值,0.95也不一定说明其相关性低,还应该检测相关显著差异性,无显著差异则说明R是可信的。当然了,R2也是可信的。
什么是竞争性ELISA
竞争ELISA基于竞争结合技术,即样本中的待测分子与固定量的标记的同样分子(我们一般用碱性磷酸酶作为标记)同时与固定在孔板上的抗体的同一结合位点进行ω 竞争,参照标准曲线,试验数据值是定量的。
什么是夹心ELISA
夹层ELISA采用对样本中分析物的特异的抗体作为固定化的捕获抗体,然后用第二个◆带标记的抗体作检测,检测抗体对分析物也是专一的。当参照标准曲线时,试验数据值是定量的。
一个微孔板上可做多少个样本
这是基于96孔微孔板的测试。除去阳性对照、阴性对照、本底(空白)和检测抗体对照外,还剩下88孔,可做44个样本(每个样本做双份)。
标本︾的采集
血清:
室温血液自然凝固 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
◇ 血浆:
应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或」肝素作为抗凝剂,加入 10 %( v/v )抗凝剂 ( 0.1M柠檬酸钠或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合
10-20 分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。如有沉淀形 成,应再次离心。
◇ 尿液、胸腹水、脑脊液:
用无菌管▲收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
◇ 细胞培养上清:
检测分泌性的█成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。检测细胞内的 成份时,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀
释细◥胞悬液,细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集
上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
◇ 组织标本:
切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS ,缓冲〖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制剂或 50U/ml 的Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀
浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。
分装后一份待检测,其余冷冻备用。