人类认识微观世界从DNA开始,而DNA无色透明人类用肉眼无法观察的到,因此分子生物学技术应运而生。分子生物学技术包括聚合酶链式反应技术、琼脂糖凝胶电泳技术及凝胶图谱观察技术,三门〇技术的有机结合揭开了DNA的神秘面纱。
分子生物学技术分类:
1.聚合酶链式反应技术:利用碱基互补配对的原则,人为的将适量的DNA复制过程中所需要的组分组合在一起,经过多次变性、退火、延伸的循环,从而使目的基因在体外得到扩增,最终得到大量的目的基因。
1)中〗文菜单操作简便 1)英】文操作键盘
2)开放式反应过程,实验更加直观 2)闭合式反应过程
3)实验耗时仅需31min 3)实验耗时2-3h
2.琼脂糖凝胶电泳技术:以琼脂糖凝胶作为介质∮,DNA在外加电场的作用下泳动的技术.
电泳仪:提供电泳所需要的恒定电 水︼平电泳槽:进行电泳的场所电压或电流。
3.凝胶图谱观察技术:观察琼脂糖凝胶电泳█的实验结果。
花青素核酸荧光染料与DNA嵌合后,只需可见光激发即发射黄绿色荧光↑,代替了传◣统的EB和紫外线照射,确保中学实验教学活动的安全性。
分子生物学实验开展流程:
1.仪器、试剂耗材准备
1)仪器:全自动基因扩增仪(pcr仪)、电泳仪、水平电泳槽、DNA图谱ㄨ观察仪。
2)试剂耗材:极速pcr试剂盒(包括pcr反应的七种组分)、琼脂糖凝胶电泳试剂盒∞(包括琼脂▅糖、电泳缓冲液、载样缓冲液、染料)
2.仪器参数设置←:
1)全自动基因扩增仪(pcr仪):预变性-93℃ 30s、变性-93℃ 20s、退火-52℃ 20s、延伸-72℃ 20s、保温-72℃ 30s,反应设定30个循环。
2)电泳仪:电压60-70V,时间30-40min。
3.实验流程:
1)基因扩增:将pcr反应的七种组分混合后加入液体石蜡进〇行液封,放入pcr仪中◎进行扩增。
2)琼脂糖凝胶电泳:
a.制胶:使用1×TAE(0.5×TBE)缓冲液在制胶器上配制1.0%的琼脂糖凝胶。
b.混样:将2μL 染料与上样混合物与20μLPCR产物混匀。
c.点样:将上步混好的样品取20μL加到凝胶孔中。
d. 电泳:60V-70V电压〒下电泳(5-10V/cm)30-40min。(指示带距前段1cm处)
3)观察:打开电源,将凝胶放入图谱观察仪的抽屉中,在滤光→片上方观察。
分子生物学实验逐渐成为高中生物实验教学的重点实验,专业的实验仪器设备¤为分子生物学实验顺利开展□ 保驾护航。
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