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                第六届图书馆〒论坛580*60

                ELISA检测e抗原灵敏度更高

                教育装备采购▓网 2013-12-19 10:25 围观466次

                  E抗原是从乙肝表面抗原(HBsAg)阳性血清中发现的一种新抗原,他可能与乙型肝炎的传染性有密切关系。李羽等报道用ELISA检测e抗原的灵敏度比琼脂免疫扩散法高150—300倍。试验程序:

                  1.病人免疫球蛋白IgG(e抗体)的提取:用饱和硫酸铵沉淀法处理上述抗体阳性人血清所得粗提液过柱(DEAE-Cellulose)收集IgG阳性部分,再穿流正常人血▓清柱。得IgG(e抗体),浓缩为5ng/ml贮藏放◆于冰箱中。

                  2.酶标记IgG(e抗体)的制备:用戊二醛二步法,将10mg HRP交联5 mg IgG(e抗体),分装于小瓶,在低温(-20°C)下保存。

                  3.ELISA对e抗原的检测:

                  a. IgG(e抗体)包被◣聚苯乙烯微量反应板,在4°C过一夜(IgG浓度为25r/ml)。

                  b.洗涤3-5次。

                  c.加待检病员血清(1:10稀释,每︼份标本加两孔,每孔0.1ml,37°c孵育2h).

                  e.洗涤3-5次。

                  f.加酶标记IgG(e抗体),37°C孵育2h(酶标记IgG稀释度为1:640)。

                  g.洗涤3-5次。

                  h.加底物与供氢体(H2O2与OPD),置于暗处反应30min.

                  i.加2mol/L硫酸终止反应。

                  j.每板均设阳性与阴性对照↑,根据不同的显色反应》予以判断。

                  k.经过上诉方法检测初步确定为阳性的标本,取两份,一√份加足量的e抗体血清,另一份加正常人血清,在37°C孵育1h,然后再按上述方法测定e抗原。加e抗原体血清者,在显色反应受∞到控制(与正常血清对比)时才可判▃断为e抗原阳性。

                 

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