本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中线粒体呼吸链复合物I的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠线粒体呼吸链复合物I水平。用纯化的大鼠线粒体呼吸链复合物I抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入线粒体呼吸链复合物I，再与HRP标记的线粒体呼吸链复合物I抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加∑ 底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的线粒体呼吸链复合物I(NADH-辅酶Q还原酶)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠线粒体呼吸链复合物I浓度。
试剂盒组〓成：
试剂盒组⊙成48孔配置96孔配置保存
说明书1份1份
封板膜2片(48)2片(96)
密封袋1个1个
酶标包被板1×481×962-8℃保存
标准品：9U/mL0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存
酶标试剂3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
样品稀释液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
显色剂A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
显色剂B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存
样本处理及要求：
1. 血清：室温血∞液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离∏心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保♀存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份※时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞█悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过↓反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份ぷ。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保〓持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快¤进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反卐复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤：
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀;然后■从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀;混匀︼后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀〗后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为6U/mL，4U/mL ，2U/mL，1U/mL，0.5U/mL)。
2. 加样：分别设空白孔(空白对Ψ 照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔▅底部，尽量不触→及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏◎水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空■白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡∞混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：
1. 试剂盒从冷藏环→境中取出应在室温平衡15-30分钟『后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能♀会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验△误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标Ψ本数量多，推荐█使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性▼使用，以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪≡读数为准.
8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标∮准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释
倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方◣程式，计算出◣样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
0.3U/mL -7U/mL
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：;2-8℃。
2.有效期：6个月
