火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIE)是将单向免疫扩散与电泳相结合的一项定量检测技术,实质上是加速的№单向扩散试验。实验时,将抗体混合于琼脂中,样品孔中的抗原置于负极端,电泳时抗体不移动,抗原向正极泳动,随着⊙抗原量的逐渐减少,抗原泳动的基底区越来越窄,抗原抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄,形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰。当琼脂中抗体浓度固定时,峰的高度与抗原量呈正相关,因此用已知标准抗原作对照,抗原浓度为横坐标,峰的高≡度为纵坐标,绘★制标准曲线,待测样品浓度就可根据沉淀峰的高度在标准曲线中计算获得。如果将琼脂中加入固定浓度的抗原时,便可检测抗体的含量(称为反向火箭电泳〇)。
火箭免疫电泳图
①②③④为标准抗※原;⑤⑥为标本
影∮响火箭电泳的因素很多,因此在操作时应注意以下几点:
1.所用琼脂应是无电渗或电渗很小的,否则火箭形状不规则。
2.注意电泳终点时间的确定▂,如火箭电泳顶部呈不◢清晰的云雾状或圆形,则表示未达终点。
3.待测标本数量多时,电泳板】应先置电泳槽上搭桥并开启电源(电流要小)后加样,否则易形成宽底峰形,使定量▲不准。
4.作IgG定量时,由于抗原和抗体△的性质相同,火箭峰因电渗呈纺锤状,为了纠正这←种现象,可用甲醛与IgG上的氨基结合(甲酰化),使本来带◤两性电荷的IgG变为只带负电荷,加快了电ξ 泳速度,抵消了⊙电渗作用,而出现伸向正极的火箭峰。
火箭电泳作为抗原定量只能测定鹏/ml以上的含量,如低于此♀水平则难以形成可见的沉淀峰。加入少量125I标记的标准抗原共同电泳,则可在含抗体的琼脂中形成不可@见的火箭峰,经洗◆涤干燥后,用X线胶〒片显影,可出现放射显影,这就是目前采用的免疫自显影技术,根据自显影火箭峰降低的程度(竞争法)可计算出抗原的浓度。免疫白显影技术可测出ng/ml的抗原浓度@ 。