凝胶内沉淀试验(gelphaseprecipitation)是利用可溶性抗原和相应抗体在凝胶中扩散,形成浓度∩梯度,在抗原抗体相遇并且浓度比例适当的位置形成肉眼【可见的沉淀线或沉淀环。常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶,根据试验的要求用生理盐水或缓冲液配制。适宜浓度的凝胶实际上是一种固相化的缓冲液,水分占98%以上,凝胶形成网络结构,将水分固相化,抗原和抗体蛋白质在此凝胶内扩散,犹如在液体中自由运动。大分子(分子量为20万以上)物质在凝胶中扩散较慢,利用此特性①可识别分子量的差别。另外,由于凝胶网孔有一定的限度,抗原抗体结合后,复合物的分子量至少应在百万以上,这种超大分子则被网络在凝胶中,经盐水浸泡也只能去除游离的抗原或抗体,这给后面的分析带来极大的方便。
根据抗原与抗体反应的方式和特性,凝♀胶内沉淀试验可分为单向扩散试验和双向扩散试验ぷ。
单向扩散试验(singlediffusiontest)是在琼脂凝胶中混入一定量的抗体,使待测的抗原溶液从局部向琼脂内自由扩散,在一定区域内形成可█见的沉淀环。根据试验形式可分※为试管法和平板法两种。
双向扩散试验(doublediffusiontest)是让抗原和抗体双方都在琼脂中各自向对方扩散,在比例恰当之处形成抗原抗体沉淀线,观察这种沉淀线的位置、形状以及对≡比关系,可对抗原或抗体进行定性分析。根据试验形式也可分为试管法和平板法两种。