对流免疫电泳(counterimmunoelectrophoresis,CIEP)实质上是将双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术。在pH8.6的缓冲液中,大部分蛋白质抗原成分常带较强的负电荷,在电场中向正极移动;而作为抗体的IgG,等电点偏高(约为pH6-7),在pH8.6时带负电荷较少,再加上分子量较大,移动速度慢,所以它本身向正极移动缓慢甚至不移动,这样它就会在凝胶的电渗作用下,随水流向负极,电渗引向负极移动的液流速度超过了IgG向正极的移动,因此抗体移向负极,在抗原抗体最适比处形成沉淀线,从沉淀线相对于两孔的位置还可大致判断抗原抗体的比例关系。实验时在琼脂板上打两排孔,标记上正极与负极,将抗原溶液放人负极侧的孔内,相应抗体放人正极侧的孔内,通电后,带负电荷←的抗原向正极泳动,而抗体借电渗作用向负极泳动,在两者之间或抗体的另一侧(抗原过量时)形成沉淀线。在抗原浓度超过抗体时,沉淀线靠近抗体孔,抗原浓度越高,在抗体孔边沿出现弧形沉淀线,甚至超越抗体孔。本试验简便、快速,灵敏度比双向免疫扩散法高8~16倍,可测出蛋白质的浓度达ug/m1。
对流免疫电泳图
nbsp; Ag为阳性;②Ag为弱阳性;C3)Ag为强阳性;④Ag为强阳性
IgG作为蛋白质在电泳中比较特殊,4个亚型有不同的表现,IgG3和IgG4与一般蛋白质无异,泳向正极,而IgGl和IgG2则因其带电荷少,受电渗的作用力大于电泳,所以被水分子携裹向负极移动。这就形成了IgG的特殊电泳形式:一部分泳向正极,另一部分泳向负极,在抗体孔两侧都有抗体存在,因此所谓对流只是部分IgG的电渗作用所致。