GV3101 感受态细胞基因型
C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline
GV3101 感受态细胞产品说明
GV3101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化←操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮★助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒含有筛选标签：gent，赋予GV3101菌株庆大霉素抗性，适用◣于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作〓，本公司生产的GV3101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒检测转化效ζ 率>104cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融ω化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率◇较高，次使用前做预实验确定所加质粒的量），用手管底混ω 匀，依次于冰▓上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700 μl无抗生卐素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收◎菌，留取100 μl左右上清※轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天
（当平板只含有50 μg/ml kan 时，28℃培养48 h即可；平板中同时加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 时，需28℃培养60 h；如果⊙使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h）。
GV3101 感受态细胞注意事项
1. 加入质〗粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下ω 降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔♀操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营○养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应︾减少质粒用量。
4. 利福平浓度不应高于25 μg/ml，过高的利福平◣浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长●速度和转化效率。本¤公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan，若¤所用平板含有20 μg/ml rif则转化效率降◤低到1/2。
5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆■菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于ㄨ农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概◥率极低(可以忽略)。
备注
1、农杆菌相关抗生素配方：
抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
羧苄青霉素⊙（carb） | 双蒸水溶解↑，0.22 μm滤膜ξ过滤除菌】】 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
硫酸卡那◥霉素（kan） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
链霉素（strep） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml | 50 μg/ml |
利福平（rif） | DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml | 20 μg/ml |
庆大霉素（gent） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 20 mg/ml | 40 μg/ml |
2、常用农杆菌抗性：（R：抗；S：敏感。）
农杆菌菌株 | 羧苄青霉素(carb) | 链霉素(strep) | 利福平(rif) | 庆大霉素(gent) | 硫酸卡那霉素→(kan) |
AGL-1 | R | S | R | S | S |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
3、LB及YEB配方：
component | LB(液体)/L | LB(固体)/L | component | YEB(液体)/L | YEB(固体)/L |
Tryptone | 10 g | 10 g | Tryptone | 5 g | 5 g |
Yeast extract | 5 g | 5 g | Yeast extract | 1 g | 1 g |
NaCl | 10 g | 10 g | 牛肉浸膏 | 5 g | 5 g |
NaOH | 调PH到7.0 | 调PH到7.0 | 蔗糖 | 5 g | 5 g |
Agar | － | 15 g | MgSO4*7H2O | 0.49 g | 0.49 g |
NaOH | 调PH到7.0 | 调PH到7.0 | |||
Agar | － | 15 g |
10种农杆菌化学转化感受态产品仅需冰、液氮和37℃ 热激操作即可，实验简单方便，经pCAMBIA2301 (11.6 Kb)质粒检□测转化效率可达1×104 cfu/μg。同时提供7种农杆菌电击感受态产品，可成功转化大于50 Kb的载体，经pCAMBIA2301 (11.6 Kb)质粒检测转化效率可达1×105 cfu/μg。
| 感受态种类 | 转化方法 | 应用 |
| GV3101 | 化转电转 | 适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物转基因操作 |
| EHA105 | 化转电转 | 适用于水稻、烟草等植物的转基因操作 |
| AGL1 | 化转电转 | 适用于水稻、拟南芥、杨树≡等植物的转基因操作 |
| LBA4404 | 化转电转 | 适用于ぷ菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作 |
| EHA101 | 化转电转 | 适用于玉〇米、水稻、烟草等植物的转基因操作 |
| GV3101(pSoup) | 化转电转 | 在GV3101菌株中＠转入help质粒：pSoup，可帮助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌中复制 |
| GV3101(pSoup-p19) | 化转电转 | 在GV3101菌株中转▂入help质粒：pSoup-p19，可帮助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌中复制 |
| GV3101(pJIC SA_Rep) | 化转电转 | 含辅助质粒：pJIC SA_Rep，可帮助pgR106，pgR107，pGreen，pGs2系列质粒在农杆菌中复制 |
| EHA105(pSoup) | 化转 | 在EHA105菌株中』转入help质粒：pSoup，可帮助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌中复制 |
| AGL1(pSoup) | 化转 | 在AGL1菌株中转入help质粒：pSoup，可帮助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌中复制 |
