稳定型萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒
Steady Firefly Luciferase reporter Assay Kit
货号 |
规格 |
Luc-10 |
10毫升 |
Luc-100 |
100毫升 |
萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒(Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit),是一种以荧光素(luciferin,也称萤光素)为底物, 检测荧光素酶(firefly luciferase, 也称萤光素酶)活性的→试剂盒。萤火虫荧光素酶是一种分子量约为61 KD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下, 可以催 化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中,会发出生物发光(bioluminescence)。生物发光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。
通过荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把所研究基因的转录调控元件或 5’启动子区克隆在luciferase基因的上游,或把3’-UTR区克隆在luciferase基因的下游, 构建成报告基因(reporter gene)质粒,然后转染细胞,用适当方法处理细胞后,测定荧光素酶的活性。通过荧光素酶活性的高低,来判断处理方法对目的基因的转录调控的影响。
保存条件:
-20ºC避光保存6个月有效,-80ºC避光保存,一年有效。尽量避免反复冻融。
使用方法:
萤光素酶报告基因的主要优点:
报告基因 |
优点 |
缺点 |
萤光素酶 |
优越的灵敏度 |
需要底物 |
高信号值 |
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无内源活性 |
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灵敏度好 |
细菌,血清等内源活性高 |
需要底物 |
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灵敏度好 |
90% 的 E.coli, 人/动物细胞中有内源活性 |
植物中内源活性低 |
酶的扩散可引起 “过度报告” |
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需要底物 |
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分泌性报告基因 (不需裂解) |
在 HeLa ,癌和其它细胞类型中有高的内源活性 |
需要底物 |
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真核细胞没有背景表达 |
放射性的 |
易于使用 |
灵敏度底 |
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设备现成(液闪仪,层析) |
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显微镜: 亚细胞定位 |
背景可能高 |
不需底物 |
折叠 “情形” 可导致信号差别 |
稳定型萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒的优点
主要应用领域
1、启动子核心区域检测,增强子/抑制子等调控子核心元件检测;
2、启动子/增强子与转录因子的相互作用,启动子区可能的转录因子结合位点检测;
3、细胞信号转导途径研究;
4、病毒/细胞相互作用;
5、药物等化学诱导因素或射线等物理诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强)。
注意事项:
常见问题: