人抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)ELISA试剂盒组成
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试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
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说明书 |
1份 |
1份 |
R.T. |
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封板膜 |
2片（48） |
2片（96） |
R.T. |
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密封袋 |
1个 |
1个 |
R.T. |
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酶标包被板 |
1×48 |
1×96 |
2-8℃保存 |
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标准品：27pg/ml |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品稀释液 |
1.5ml×1瓶 |
1.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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酶标试剂 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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样品稀释液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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显色剂A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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显色剂B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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终止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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浓缩◣洗涤液 |
（20ml×20倍）×1瓶 |
（20ml×30倍）×1瓶 |
2-8℃保存 |
人抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)ELISA试剂盒样本处理及要求
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收◣集上清，保存过程中如出▅现沉淀，应再→次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有卐沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成→，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行※。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过∏反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入◤一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆↓充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能ω马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检☉测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物√酶的（HRP）活性。
人抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)ELISA试剂盒操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标卐准品100μl，然后在↑第一、第二孔中加标准品稀★释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在『第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔▼中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为18 pg/ml，12 pg/ml，6 pg/ml，3 pg/ml，1.5 pg/ml）。
2. 加样：分别设空白⊙孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其□余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测ㄨ样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃◥动混匀。
3. 温育：用ぷ封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30(48T的20倍）倍浓缩洗涤液用◣蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗【涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每◣孔加入酶标试剂50ul，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50ul，轻轻震荡◤混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50ul，终止反应（此时蓝√色立转黄色）。
11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内◣进行。
人抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)ELISA试剂盒注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被︻板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
1. 浓洗涤液可能会有▽结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
2. 各步加样均应使用加样器，并经常校对〗其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐□ 使用排枪加样。
3. 请每次测△定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品¤孔第一孔的OD值），请先用▂样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以＠总稀释倍数（×n×5）。
4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5. 底物请避光保存。
6. 严格按照说明书的操作】进行，试验结果判定必须以酶标仪读∩数为准.
7. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
8. 本试剂不同批号组分不得混用。
人抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)ELISA试剂盒试剂盒◥性能
1.样品线性◥回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%
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