DR4 ELISA试剂盒 组成
试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
说明书 |
1份 |
1份 |
R.T. |
封板膜 |
2片(48) |
2片(96) |
R.T. |
密封袋 |
1个 |
1个 |
R.T. |
酶标包被板 |
1×48 |
1×96 |
2-8℃保存 |
标准品:27pg/ml |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
标准品稀释液 |
1.5ml×1瓶 |
1.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
酶标试剂 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
样品稀释液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
显色剂A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
显色剂B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
终止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 |
(20ml×20倍)×1瓶 |
(20ml×30倍)×1瓶 |
2-8℃保存 |
DR4 ELISA试剂盒 样本处理及要求
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集▂上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离々心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无◥菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心︼。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过◥反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标√本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不╳能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避ξ免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
DR4 ELISA试剂盒 操作步骤
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一∏孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加↘标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加∑到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后「从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释←后各孔加样量都为50μl,浓度分别为18 pg/ml,12 pg/ml,6 pg/ml,3 pg/ml,1.5 pg/ml)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标∞板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃╳动混匀。
3. 温育:用封板☆膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后◆备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50ul,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50ul,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液⌒50ul,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
DR4 ELISA试剂盒 注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
1. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
3. 请每次ζ 测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品∩孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
4. 封板膜∴只限一次性使用,以避免交叉污染。
5. 底物请避光保存。
6. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
7. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传√染物处理。
8. 本试剂不同批号组分不得混用。
DR4 ELISA试剂盒 性能
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%
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