逆转录病毒通过整合进目的细胞基因组,能实现持久的表达,而且几乎没有免疫原㊣性,因此很受欢迎。特别是和腺病毒相比,其能整合进基因组的优势导致逆转录病毒也被广泛应用,然后逆转录病毒系统也存在一定的缺陷,首先是安全性比较低,因为所有包装所需的基ㄨ因都放到一个载体上,还有就是基因能整合进目的细胞也可能会导致细胞基因组的紊乱,而且其滴度比较低。由于逆转录病毒表达系统的特殊性,其包装细胞的种类较多,表达载体的种类也较多,因此需要根据不同的实际来选择合适的◆表达系统。Cell Biolabs的逆转录病毒表达产品包括包装细胞系、表达系统(同时包括了包装细胞和表达质粒载体)、逆转录病毒表达质粒以及插入了目的基因的重组逆转录病毒表达质@ 粒。
逆转录病毒包装细胞系—铂金版Plat-E/Plat-A/Plat-GP系列Cell Biolabs提供三种铂金版逆转录病毒包装细胞系:单嗜性(Ecotropic)Plat-E包装细胞系、双嗜性(Amphotropic)Plat- A包装细胞系及泛嗜性(Pantropic)Plat-GP包装细胞系。它们对不同的细胞具有不同的〓侵染性。
Plat-E包装细胞系(Ecotropic)是一种来源于人胚肾(Human Embryonic Kidney, HEK)293细胞系,主要用于快速、短暂地产生高滴度逆转录病毒,同时也能用于稳定地产生逆转录病毒。由Plat-E包装细胞系产生的病毒表达一种单嗜性的被膜,因而只能感染小鼠和大鼠细胞。Plat-GP包装细胞系(Pantropic)也来源于HEK293,但却是一种泛嗜性的包装细胞系,其包装产生的逆转录病毒颗粒既能感染哺乳动物细胞,也能感染非哺乳动物细胞。在㊣使用过程中, Plat-GP细胞需要用逆转录病毒载体和pVSV-G来共转染。VSV-G是泡状口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus) 的被膜糖蛋白,能通过◥脂质结合及质膜融合来介导病毒进入细胞。因此在使用Plat-GP细胞系时,还需要额外的使用pVSV-G完成包装。Plat-A包装细胞系(Amphotropic)也是一种⊙来源于HEK293细胞的细胞,在将病毒env 基因导入该细胞时利用嘌呤霉素作为选择标记,因而对于一些@使用嘌呤霉素作为筛选标记的载体无法使用。
Product Name Size Catalog Number
Platinum-E Retroviral Packaging Cell Line, Ecotropic >3 x 106 cells RV-101
Platinum-A Retroviral Packaging Cell Line, Amphotropic >3 x 106 cells RV-102
Platinum-GP Retroviral Packaging Cell Line, Pantropic >3 x 106 cells RV-103
pVSV-G Packaging Vector 10 μg RV-110
一般来说,Plat-E是最常用的逆转〒录病毒包装细胞;Plat-GP则是适用性最广的逆转录包装细胞(但是需要多增◢加一个表达载体pVSV-G Packaging Vector提供外︼壳蛋白VSV-G,该外壳蛋白宿主范围非常广);Plat-A用的比较少,但是其宿主范围比Plat-E要多一些,比如可应用于人、猴、狗来源ζ的细胞等。
美国√著名细胞产品公司Cell BioLabs为逆转录病毒研究人员提供完备的重组逆转录病毒表达系统及其相关产♂品和服务,产品包括逆转录病毒的最新一代表达系统,针对逆转录病毒滴度低的软肋而专门设计的逆转录病毒浓缩纯化试剂盒,逆转录病毒的快速定量,以及逆转录病毒高效转染试剂和用』于包装重组逆转录病毒的∞包装细胞系等,几乎覆盖反转录病毒研究中的所有技术环节