蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF
品 名：蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF（Protein AG Sepharose Fast Flow，Protein AG Sepharose FF）
目 录 号：NRPB13L、NRPB13S（预装柱）
规 格：20 ml，100 ml，1L，1 ml预装柱， 5 ml预装柱，10 ml预装柱
贮 存：20%乙醇，2~8℃保存。
运 输：2~25℃、常压、避光。
保 质 期：5年。
相关介绍：
蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF是将重组蛋白A蛋白G融合蛋白（NRPA14，r-PAG）键合在琼脂糖凝胶微球上形成的亲和分离介质。同单独的蛋白A或蛋白G分离介质】相比，具有更宽广的结合范围，可以与人所有的IgG亚型、IgA、IgE、IgM结合，但不能与小鼠的IgA、IgM和血清白蛋白结合，适合用于鼠IgG单抗的提取和检测。同时融合后的r-PAG降低了对pH值的依赖，允许在pH5~8进行结合。
技术指标：
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基质 |
6%交联琼脂糖凝胶微ζ 球 |
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配基 |
蛋白A蛋白G融合蛋白 |
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配基密度 |
≥6 mg/ml |
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填料粒径 |
45~165 μm |
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最大流速 |
750 cm/h |
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推荐流速 |
100 cm/h |
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工作（清洗）pH值 |
3~9（2~10） |
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耐反压 |
0.3 MPa |
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载量 |
≥35 mg IgG /ml |
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保存条件 |
+2~8℃保存于20%乙醇溶液中 |
IgG与不同蛋白的典型结合：
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种类 |
亚型 |
蛋白A |
蛋白G |
蛋白A蛋白G融合蛋白 |
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人 |
IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab |
+++ +++ + +++ + - + + |
+++ +++ +++ +++ - - - + |
+++ +++ +++ +++ + - + + |
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小鼠 |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM |
+ +++ +++ +++ - |
++ +++ +++ +++ - |
++ +++ +++ +++ - |
|
大鼠 |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c |
+ - - +++ |
++ +++ + +++ |
++ +++ + +++ |
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牛 |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
+++ +++ |
|
山羊 |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
+++ +++ |
|
马 |
IgG(ab) IgG(c) IgG(T) |
+ + - |
- - +++ |
+ + +++ |
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兔 |
IgG |
+++ |
+++ |
+++ |
|
猪 |
IgG |
+++ |
+ |
+++ |
|
狗 |
IgG |
+++ |
+ |
+++ |
|
鸡 |
IgY |
- |
- |
- |
注：-表示不结合；+表示微弱结合；++表示中等结合；+++表示很强结合。
应用举例：
结合缓冲液：20 mM磷酸缓冲液，150 mM NaCl，pH 7.4
洗脱缓冲液：0.1 M Glycine-HCl缓冲液，pH 2.5
中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 9.0
1) 1 ml蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF预装柱用5~10个柱体积的蒸馏水洗去保存液；
2) 用结合缓冲液平衡 5~10个柱体积；
3) 将3 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到15 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；
4) 用结合缓冲液再洗 5~10个柱体积；
5) 用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和◆缓冲液调节其pH值至中性；
6) 目的抗体洗脱后用结合缓冲液清洗5~10个柱体积以平衡柱子；
7) 分析洗脱下来的兔多抗。
注意事项：
1) 预装柱使用简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务；
2) 样品洗脱后一般pH很低，应立刻用碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0）将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5%~10%、pH 7.5的缓冲液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活；
3) 使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，如果已经产生气泡，可以自行重装柱子；
4) 多次使用后会有沉淀蛋白，强疏水性Ψ蛋白，脂蛋白，脂质体等非特异吸附凝胶↓上，可以用0.1 %去垢剂短时间清洗，如0.1% Triton X-100清洗2个柱体积，立即用结合缓冲液洗5-10个柱体积。也可以用70%乙醇清洗作同样清洗。
5) 本产品保存条件为20%乙醇，+2~8℃。
