DEAE-琼脂糖凝胶FF
品 名：DEAE-琼脂糖凝胶FF（DEAE Sepharose FF）
目 录 号：NRPB21L、NRPB21S（预装柱）
规 格：20 ml，100 ml，1 L，1 ml预装柱，5 ml预装柱，10 ml预装柱
贮 存：20%乙醇，2~8℃冰箱保存。
运 输：2~25℃、常压、避光。
保 质 期：5年。
相关介绍：
DEAE-琼脂糖凝胶FF是一种将二乙胺╱基乙基键合在琼脂糖↓微球上形成的带有弱碱阴离子基团的层析分离介质。该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构，与生物活性大分子有很好的相容性，具有离子交换容量高，、特异性吸附少和流速快等特点，广泛用于蛋白质、核酸、多肽及多糖等生物大分子的实验室规模制备以及¤生物制药、生物工程的工业化制备。
技术指标：
|
外观 |
乳白色半透明凝胶状微球 |
|
基质 |
6%交联︼琼脂糖 |
|
离子交换■类型 |
弱碱阴离子基团 |
|
配体 |
-O-CH2CH2-N+(C2H5)2H |
|
配体密度 |
100~180 μmol/ml |
|
蛋白质载量 |
~110 mg BSA/ml |
|
最大流速 |
700 cm/h |
|
推荐流速 |
50~100 cm/h |
|
粒径范围 |
45~165 μm |
|
耐反压 |
0.3 MPa |
|
工作温度 |
4~40℃ |
|
耐热 |
pH7水中，120℃灭菌30 min |
|
pH稳定性 |
2~12（长时间）；1~14（短时间） |
|
化学ω稳定性 |
在常用水相缓冲液、1 M氢氧化钠、8 M尿素、6 M盐酸胍和70%乙醇中稳▅定。 |
|
保存条件 |
+2~8℃保存于20%乙醇溶液中 |
使用方法：
1. 装柱
1.1 根据分□ 离目标的性质配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
1.2 将凝胶抽干，用蒸馏水洗→涤2次去除保存时的乙醇，按凝胶: 初始缓冲液=3:1的比例配成匀】浆并脱气。
1.3 将层析柱垂直固定，底端用水或缓冲液润湿并保持一段液位。
1.4 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，使凝胶在柱内自由沉降。
1.5 连结∑ 好柱子顶端活动柱头，打开蠕动泵，让缓冲液用操作流速流过5个柱体积，再使用1.5倍的操作流速流过5个柱体积，调□节适配柱头，使其尽量贴近胶面，最后用2~3个柱体积的缓冲液平衡柱子。
注意：（1）所有操作过程不能ㄨ引入气泡，保证装胶的均匀度。（2）如填料层有气泡，需要重◣新填装。（3）如无条件做1.2步骤 ，可进行2次装柱，去除保存时 的乙ぷ醇和气泡。（4）乙醇等试剂配╳制的溶液需要脱气。
2. 平衡
将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱，观察检测器的变化，直到〗电导率√、pH值等参数不变。
3. 上样
切换转换阀进行上样，上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择，也可通过线性实验找到最佳上样量。
样品的预处理：除盐，置换缓冲液，澄清过滤（0.45 μm、0.22 μm）等。
4. 冲洗
用2~3个柱体积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱，观察检测器的变化，直到电导率、pH值等参数不变，此时未交换的组分被清洗出去。
5. 洗脱
离子交换柱的洗脱可用恒定洗▼脱、梯度洗脱或者阶跃洗脱。一般推荐使用增大盐浓度的梯度洗脱。
6. 再生
用高盐浓度的缓冲▂液（含1~2 M NaCl）按操作流速冲洗3~5个柱体积，接着用平衡液洗到平衡3~5个柱体积。
再生时若有失活蛋白质或脂类物质洗不掉，可用在位清洗法（CIP）除去。
7. 在位清洗（CIP）
对于强结合的蛋白质或脂类物质，可采用以下流程进行在位清洗：1 M NaOH洗2个柱体积，8 M尿素洗2个柱体积， 30%异丙醇洗2个柱体积，平衡缓冲液洗2个柱体积。
在位清洗可有效去除介质上的杂质，反向清洗效果更佳。如需要去除内毒素热原，可以在50 cm/h速度下，1 M NaOH清洗1-2 h，再用无热原的1M NaCl溶液置换（OH-置换为Cl-）。
