苯基-琼脂糖凝胶FF
品 名：苯基-琼脂糖凝胶FF（Phenyl Sepharose FF）
目 录 号：NRPB31L、NRPB31S（预装柱）
规 格：20 ml，100 ml，1L，1 ml预装柱，5 ml预装柱，10 ml预装柱
贮 存：20%乙醇，2~8℃冰箱保存。
运 输：2~25℃、常压、避光。
保 质 期：5年。
相关介绍：
苯基-琼脂糖凝胶FF是一种将苯基键↑合在琼脂糖凝胶微球上形成的较强疏水性疏水层析分离介质。该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构，与生物活性大分子有很好的相容〗性，具有载量高、非特异性吸附少、流速快等特点，广泛用于具有一定疏水⌒ 性能的蛋白质、多肽等生物大分子的实验室规模制备和生物制药、生物工■程的工业化制备，典型应用如重组人粒巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、人集落刺激因子（M-CSF）、表皮〗生成因子（EGF）的生产以及单克隆抗体的纯化。
技术指标：
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外观 |
乳白色半透明凝胶状微球 |
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基质 |
6%交联琼脂糖 |
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配体 |
苯基（-C6H5） |
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配体密度 |
25 μmol/ml |
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蛋白质载量 |
~50 mg BSA/ml |
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最大流速 |
700 cm/h |
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推荐流速 |
100 cm/h |
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粒径范围 |
45~165μm |
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耐反压 |
0.3 MPa |
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工作温度 |
4~40℃ |
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耐热 |
pH7水中，120℃灭菌30 min |
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pH稳定性 |
3~13（长时间）；2~14（短时间） |
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化学稳定性 |
在常用水相缓冲液、1 M氢氧化钠、8 M尿素、6 M盐酸胍和70%乙醇中稳定。 |
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保存条件 |
+2~8℃保存于20%乙醇溶液中 |
使用方法：
1. 装柱
1.1 根据分离目标的性质配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱】缓冲液。
1.2 将凝胶抽干，并用蒸馏水洗涤2次去除保存时的乙醇，用蒸馏水配成◥匀浆并脱气。
1.3 将层析柱垂直固定，底端█用水或缓冲液润湿并保持一段液位。
1.4 用玻璃棒引导匀浆╲沿着柱内壁一次性倒入柱内，使凝胶在柱内自由沉降。
1.5 连结≡好柱子顶端活动柱头，打开蠕动泵，让缓冲液用操作流速流过5个柱体积，再使用1.5倍的操作流速∮流过5个柱体积，调节适配柱头，使其尽量贴近胶面，最后用2~3个柱体积的缓冲液平衡柱子。
注意：（1）所※有操作过程不能引入气泡，保证装胶的均匀度。（3）如无条件做1.2步骤，填料层有气泡，可进行2次装柱，去除保存的乙醇和气泡。（4）乙醇等试剂配制的溶液需要脱气。
2. 平衡
将平衡缓冲液以操作流速平衡层析√柱，观♀察检测器的变化，直到电导率、pH值等▅参数不变。
3. 上样
切换转换阀进行上样，上样量根据样⊙品的性质和层析介质的量进行▽选择，也可通过线性实验找到最佳上样量∞。
样品的预处理：置换缓冲液，加盐，澄清过滤（0.45 μm、0.22 μm）等。
4. 冲洗
用2~3个柱体积的㊣平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱，观察检测器的变化，直到电导率、pH值等参数不变，此时未交换的组分被清洗出去。
5. 洗脱
疏水层析柱的洗脱可用恒定洗脱、梯度洗脱或者阶跃洗脱。一般推荐︽使用降低盐浓度的梯度洗脱，亦可根据实际情况添加有机溶剂进行洗脱。
6. 再生
用蒸馏水按操作流速冲洗3~5个柱体积，接着用平衡液∩洗到平衡3~5个柱体积。
再生时若有失活蛋白质或脂类物质洗不掉，可用在位清洗法（CIP）除去。
7. 在位清洗（CIP）
对于强结合的蛋白质或脂类物质，可采用以下流程进行在位▆清洗：1 M NaOH洗2个柱体积，8 M尿素洗2个柱体积， 30%异丙醇洗2个柱体积，平衡缓冲液洗2个柱体积。
在位清洗可有效去除介质上的杂质，反向清洗效果更佳。如需要去除※内毒素热原，可以在50 cm/h速度下，1 M NaOH清洗1~2 h。
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