品 名：重组蛋白A 琼脂糖凝胶
规 格：2 ml（50% slurry），4 ml（50% slurry），10 ml（50% slurry），20 ml（50% slurry），100 ml（50% slurry），200 ml（50% slurry），2 ml预装柱（50% slurry），4 ml预装柱（50% slurry），10 ml预装柱（50% slurry），20 ml预装柱（50% slurry）
相关介绍：
蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，包含有5个区域，可以同IgG的Fc片段结合。作为一个亲和配基，蛋白A能够比较紧密地偶联到sepharose上，使得这些区域可以同游离的IgG自由结合。一分子的蛋白A可以结合两分子的IgG。
技术指标：
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基质 |
6%高度偶联的琼ξ 脂糖凝胶 |
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配基 |
重组蛋白A |
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配基密度 |
3~4 mg/ml |
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填料粒径 |
45~165 μm |
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最大流速 |
300 cm/h |
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推荐流速 |
50~150 cm/h |
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pH稳定性 |
pH 3~9 |
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耐反压 |
0.3 MPa |
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载量 |
20~30 mg/ml兔多抗，25~30 mg/ml人多抗 |
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保存条件 |
+4~8℃保存于20%乙醇「溶液中 |
IgG与蛋白A的典型结合：
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种类 |
亚类 |
结合蛋白A |
吸附缓冲液pH值 |
洗脱◇缓冲液pH值 |
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人 |
IgG1 |
++ |
6.0~7.0 |
3.5~4.5 |
|
IgG2 |
++ |
6.0~7.0 |
3.5~4.5 |
|
|
IgG3 |
- |
8.0~9.0 |
≤7.0 |
|
|
IgG4 |
++ |
7.0~8.0 |
2.5~4.5 |
|
|
牛 |
IgG2 |
++ |
|
2.0 |
|
山羊 |
IgG2 |
+ |
|
5.8 |
|
小鼠 |
IgG1 |
+ |
8.0~9.0 |
5.5~7.5 |
|
IgG2a |
+ |
7.0~8.0 |
4.5~5.5 |
|
|
IgG2b |
+ |
7.0 |
3.5~4.5 |
|
|
IgG3 |
+ |
7.0 |
4.0~7.0 |
|
|
大鼠 |
IgG1 |
+ |
≥9.0 |
7.0~8.0 |
|
IgG2a |
- |
≥9.0 |
≤8.0 |
|
|
IgG2b |
- |
≥9.0 |
≤8.0 |
|
|
IgG3 |
+ |
8.0~9.0 |
3.0~4.0 |
|
|
兔 |
无差异 |
++++ |
7.4 |
3.0~4.0 |
+号的多少表示该类抗体与蛋白A结合的强弱程度。
应用举例：
结合缓冲液：20 mM磷酸缓冲液，150 mMNaCl，pH 7.4
洗脱缓冲液∩：0.1M柠檬酸缓冲液，pH 4.0
中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 9.0
1) 1 ml重组蛋白A琼脂糖凝胶预填柱用5~10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；
2) 用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积；
3) 将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；
4) 用结合缓冲液再洗 5~10个柱床体积；
5) 用洗脱缓冲液洗脱抗体，收Ψ集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性；
6) 每次使用后用3~5个柱床体积的0.1 M柠檬酸缓冲液（pH 3.0）再生清洗；
7) SDS-PAGE（图Ⅰ）电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。
注意事项：
1) 预填柱使用简易方便，在没有仪器设◣备的条件下也可以完成纯化任务；
2) 样品洗脱后一般pH很低，应立刻用碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0）将收集到的抗ω体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5%~10%、pH 7.5的缓冲液（如1 MTris-HCl或1 M磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活；
3) 使用时保证柱子和缓冲液的温度一◆致，避免柱床内产生气泡，如果已经产生气泡，可以自行重↑装柱子；
4) 通常使用后应用0.1 M柠檬酸缓冲液（pH 3.0）做再」生处理，然而长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命，每使用5次再生1次即可。
5) 本产品使用10次后最好先★用20%乙醇洗5个柱床体积，然后再用70%乙醇洗脱5-10个柱床体积，可洗脱脂类和疏水性较强的蛋白质，恢复柱子的载量和流①速。
6) 本产品保存条件为20%乙醇，+4~8℃。
