高效转染试剂盒（HET）
产品简介
? 百恩维公司生产研发的高效转染试剂盒（HET）可有效地转染各种哺乳动物细胞，通常293细胞♂转染率很容易达到40-50%，优化条件后更能高达90%以上。并且对细胞基本没有毒性。不◎仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定细胞株。
? 质粒DNA, DNA, siRNA 等均可使用。
? 可用于转染的细胞包括各种细胞株（如HEK293，NIH3T3，COS7等）和原代细〗胞（如成纤维细胞，成肌细胞，间充质干细胞，角质细胞，内皮细胞，上皮细胞等）。
? 转染前以细胞融合度不超过80%为宜。接种密度因所采用的细胞系和细胞的倍增时间而有所不同。一般而言，细胞的接种密度为3～5 × 106 cells/100-mm培养皿，1～2×106 cells/60-mm培养皿或6孔板中为6～8 ×105 cells/孔。
? 本试剂盒可转染六孔板细胞1000次，性价比非常高。
? 本试剂盒提供的试ㄨ剂都经无菌处理，并通过严格质量检验，可以直接使用。
保存条件
本试剂盒可在室温（15～25℃）保存三◥个月，4℃保存一年，-20℃保存一年以上。
包装清单
产品名称 包装
Buffer A 50ml
Buffer B 5ml
标准操作步骤
1. 使用ぷ前预热试剂至常温。
2. 转染前一天，接种适量细胞悬液至100-mm培养皿、60-mm培养皿或6孔板中，放置到潮湿37°C 5% CO2 培养∩箱培养过夜。
3. 次日，吸去细胞培养液，加入新鲜培养液（不含青霉＠ 素-链霉素）。
4. 取两根无菌1.5ml eppendorf管，分别记为A、B。按下表，根据培养皿不同而加入不同体积的试剂：
100-mm 培养皿
（含5ml培养基） 60-mm 培养皿
（含2.5ml培养基） 6孔板
（含1ml培养基）
A管：500μl Buffer A A管：250μl Buffer A A管：50μl Buffer A
B管：50μl Buffer B
10~100μg DNA
无菌水补▽足体系至500μl B管：25μl Buffer B
5～50μg DNA
无菌水补足体系至250μl B管：5μl Buffer B
1～10μg DNA
无菌水补足体系至50μl
5. 用移液管混匀B管中溶液并将B管中溶液轻轻逐滴加入到A管中。用□ 气泡法混匀转染混合物，这一步尽量在2分△钟内完成，室温孵育30分钟。
6. 将混合物逐滴加入到细胞中，轻轻摇晃培养皿使混合物均匀分布在细胞表面▂。
7. 放置到潮湿37°C、5%CO2培养箱中培▲养过夜。
8. 次日早上用新鲜培养基更换细胞培养液，于37℃ 5%CO2培养箱中继续培养24-48h。
9. 检验转染效率（如荧◥光观察，蛋白质印迹等）。
注意事项：
高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，要确保A260/A280大于1.8，并且▓电泳检
测抽提◥到的质粒90%以上都是超螺旋。
转染时，B管中溶液轻轻逐滴加入到A管中，请勿混乱顺序≡。
溶液的pH值关系到转染效率，尽量避免把转染试剂盒的溶液长时间暴露在空∮气中，以免被空气中的二氧化碳酸化。
转染时由于质粒不同、细胞不同，最佳的质粒用量需自行摸索。
为了您的安◢全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
