鱼肉中妥布霉素的测定——SPE-UPLC-MS/MS法解决方案

　　参考标准《GB/T 21323-2007 动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定 高效液相色谱-质谱质谱法》

　　目前有关妥布霉素检测的文献和标准较少，主要参考标准《GB/T 21323-2007 动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定 高效液相色谱-质谱质谱法》;高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)具有高灵敏度和高特异性，适用于基质复杂、样品组分含量很低的兽药残留的确证分析。

　　方法优势

　　迪马科技开发的《鱼肉中妥布霉素的检测》：

　　(1) 采用三氯乙酸▓水提取、ProElut PXC固相萃取柱净化和超高效液相色谱-质谱法检测;

　　(2) 具有前处理步骤简单、回收率高、方法稳定性好、净化效果优异等特点;

　　(3) 使用氰基液相色谱柱进行分析，峰形和保留时间均符合要求;

　　(4) 过柱方法简单易操作，对操作人员要求不高，检测成本相对较低;

　　(5) 定量限是20 μg/kg，与国标方法一致。

　　鱼肉中妥布霉素的测定——SPE-UPLC-MS/MS法

　　1、适用范围

　　本方案适用于鱼肉中妥◥布霉素检测。本方法定量限是20.0 μg/kg。

　　2、 标准品配制

　　(1) 单标储备液1000 μg/mL，准确称取妥布霉素，用水配制成1000 μg/mL的储备液。

　　(2) 中间液10.0 μg/mL，吸取适量单标↘储备液1000 μg/mL，用水配制成10 μg/mL的中间液。

　　3、提取

　　(1) 称取样品(鱼肉)5.0 g(精确至0.05 g)，置于50mL离心管中。加入20 mL三氯乙酸水(25 g/L)和2 mL二氯甲烷，涡旋分散，振荡5 min，8000 r/min离心2min，收集上清液;

　　(2) 在上清液中加入5 mL乙腈混匀，8000 r/min离心2 min，待净化(离心为了去除乙腈水溶解时产生的气泡)。

　　4、净化—— ProElut PXC 60 mg/3 mL(Cat.# 68203)

　　(1)活化：

　　依次加入3 mL甲醇，3 mL水，流出液弃去;

　　(2)上样：

　　将上样》液加入柱中，流出液弃去;

　　(3)淋洗：

　　(4)洗脱：

　　依次用5 mL水、3 mL甲醇淋洗，流出液弃去;

　　3 mL 20%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液;

　　(5)定容：

　　将洗脱液在40 ℃水浴下通入氮气吹至0.2 mL，然后用流动相重新定容至0.5 mL，上机分析。

　　同方法制备基质匹配标准溶液。

　　5、色谱条件

　　UPLC 条件：

　　色谱柱：Platisil CN，150 x 4.6 mm，5 μm (Cat.# 99506)

　　流 速：0.5 mL/min

　　进样量：5 μL

　　柱 温：35 ℃

　　流动相： A：3%甲酸水 B：3%甲酸乙腈 A：B=9:1

质谱条件：

定性离♂子对、定量离子对、碰撞气能量ζ　及去簇电压见下表

6、添加回收结果

鱼肉中妥布霉素检测的添加回收结果(%)

妥布霉素标准品0.2 μg/mL的MRM色谱图

鱼肉中妥布霉素的测定——SPE-UPLC-MS/MS法相↙关产品信息

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