【基本原理】

　　游离状态的考马斯亮蓝G250 在酸性溶液中呈红褐色，与蛋白质结合后呈蓝色，蛋白质含量与颜色的深浅成正比，经595nm 测定，可作出蛋白质含量与吸光度值的标准曲线，并求出未知样品的蛋白质浓度。

　　【器材】

　　1.可见光分光光度计

　　2.试管

　　【试剂】

　　1.0.9% NaCl

　　2.蛋白质标准溶液(500μg/ml)：小牛血清白蛋白50mg加生理盐水至100ml

　　3.考马斯亮蓝G250溶液：考马斯亮蓝G250 100mg加95%乙醇50ml,加85%(W/V)H3PO4 100ml加蒸馏水至1000ml，置棕色瓶过夜，用双层滤纸过滤。

　　【操作步骤】

　　(一)标准蛋白质曲线的绘制

　　1.取小试管7支，按下表操作

　　2.混匀后静置5min ，以1号为空白，595nm比色。

　　3.结果处理：以各管光密度为纵坐标。各管所含蛋白质量为横坐标,制成标准曲线「。

　　(二)蛋白质◣含量测定

　　1.按下表操作

　　2.混匀静置5min 后，以空白管调零，595nm 室温比色，根据标准曲线确定样品▅中蛋白质含量。

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