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                如何阅读分析质粒图谱

                教育装备采购网 2016-09-01 11:13 围观705次

                  一个合格质粒的组成要素包括:

                  1. 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。

                  2. 抗生素抗ζ 性基因 可以便于加以检测,如Amp ,Kan

                  3. 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段

                  4. P/E 启动子/增强子

                  5. Terms 终止信号

                  6. 加poly(A)信号 可以起到稳定mRNA作用如何阅读质粒图谱

                  第一步:首先看Ori的位置

                  了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒) 所谓穿梭质粒是指一类人工构建的具有两种不同复∮制起点和选择标记,因而可以在两种不同类群↑宿主中存活和复制的质粒载体。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间,也可以推广到真核生物表达载体的构建,如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺◣乳动物表达载体pMT2 和︽用于植物细胞的Ti 质粒。这些穿梭质粒不仅可以在大肠杆菌中复制扩增,也可以在♂相应的枯草、酵母、动物或植物细胞中扩增和表达。这样利于对质粒的分子ぷ生物学操作和大量制备。

                  第二步:再看筛选标记

                  如抗性,决定使用什么筛选标记。

                  1. Ampr 水解β-内酰胺环,解※除氨苄的毒性。 上海创赛科技提供氨苄西林/氨苄青霉素,>980 mcg/mg,USP,BR,可用于细胞培养,商品编号:C84-1507-5G,价格78元。

                  2. tetr 可以阻止四环素进入细胞。 上海创赛科技提供盐酸四环素,≥900μg/mg,USP32,BR,64-75-5,商品编号:C84-2004-10G,价格108元。

                  3. camr 生成氯霉素羟乙酰▅基衍生物,使之失去毒性。

                  4. neor(kanr) 氨基糖苷磷酸转移酶 使G418(长〓那霉素衍生物)失活

                  5. hygr 使潮霉素β失活。 上海创赛科技提供潮霉素B,>90%,粉末,进分,31282-04-9,商品编号:C84-6158-100MG,价格200元。

                  第三步:看多克隆位点(MCS)

                  它具有多个⌒ 限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入,会导致某种标志基①因的失活,而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。

                  第四步:再看外源DNA插入片段大小

                  质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说,外源DNA片段越长,越难插入,越不稳定,转化▽效率越低。

                  第五步:是否含→有表达系统元件

                  即启动子-核糖体结合位点㊣-克隆位点-转录※终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载〗体。选用那种载体,还是要以实验目的为准绳。启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号 。

                  1. 启动子:促进DNA转录的DNA顺序,这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游,是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位,但启动子本身不被转录。

                  2. 增强子/沉默子:为真核基因△组ξ(包括真核病毒基因︾组)中的一种具有增强邻近基因转录过程的〓调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子-负增强子,负调控◎序列。

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                点击进入上海创赛科∩技有限公司展台查看更多 来源:教育装备采购网 作者:上海创赛科技有限公司 责任编辑:黄磊 我要投稿
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