细胞冻存是细胞↙保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细△胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可☆以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。

　　细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐↓渐发生变化并随着传代次〓数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可々以保存一年之久;细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。

　　细胞的冻存

　　1. 为了保证细胞良好的状态，在细胞冻存的前一天使细胞处于对数增长期，同时将细胞换液◥，次日，按照细胞传代培养方法，用胰酶消☉化贴壁细胞，将↑细胞用培养基冲下来，然后，用50 mL尖底离心管离心，1000 rpm，4min，弃上清，收集细胞。

　　2. 加入适量的冻存液(10% DMSO 和 90%含有20%血清的IMDM培养基)上海创赛科技提供MRS肉汤液体培养基◥ ,商品编号：C010384-1-250g，价格280元。

　　3. 分装到冻存管中，做好标记，标明细胞名称〒，保存时间，所用培养基等。上海创赛科技提供细胞冻存管，Freezing Tubes，商品编号：C81-FCT002005-0.5ml，5000支/箱，价格3272元。

　　4. 4℃放置30 min;-20℃放置1.5 h; -70℃放置12 h;最后移到液氮罐中。

　　细胞的︼复苏

　　细胞的复苏原则＠ 是快速溶化，因为如果缓慢的溶化▓，会使进入细胞的水分∏形成冰晶，对细胞造成伤害，因此，在复苏细胞时，将冻存细胞直接放到37℃的水浴中，使其迅速溶解。在超净台内将冻存管∩内的细胞悬浮液直接倒入◆小培养瓶或培养皿内，然后，加入3 mL的培养液。次日，观察细胞生长情况，并更换细胞培养液。

　　细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明◢这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞︻冻存多采用甘油或二甲基亚㊣　砜作保护剂，这两种物质★能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以ζ保证细胞外结晶在很短的时间内即融√化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

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