时〒间过的很快,又迎来了一个月的开始,在今天的技术资料内容结合了上周的调查结果,欢迎各位朋友们关注、阅读!今天的主题内容是:恒远生物ELISA试剂盒温育中的显色。
显色是 ELISA 中的最后一步温育反应,所以起着举足轻重的作用并直接影响∏最终实验结果,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中,加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定的显色可在室温进行,时间一般不需要严格控制,有时可根据阳↘性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间,及时判断。
OPD 底物显色一般在室外温或37℃反应20-30 分钟后即不再加深,再延长反应时间,可使本底值增高。
OPD 底物液受光照会自行变色,显色反应应避光进行,显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD 产物用硫酸终▅止后,显色由橙黄色转向棕黄色。
TMB 受光照的影响不大,可在室温中置于操作台上,边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性,宜在规定的适当时间阅读结果。T MB 经HRP 作用后,约40 分钟显色达顶峰,随即逐渐①减弱,至2 小时后即可完全消退至无色。TMB 的终止液有多种,叠氮钠和十二烷基硫酸钠(SDS)等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24 小时)不褪,是目视判→断的良好终止剂。此外,各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色,此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。