牛◢副结核病是由甬0结核分枝杆菌引起的一种以反刍兽为主的慢性传染◥病，又叫johne病。该方法的敏感性76%，特异性97%,通过对2483头奶牛进行检测，检出率为6.1%，并与常规的补反和反常反应进行了比较。“前对该病尚无有效的治疗办法，根除此病的独一办法是检出、隔ζ离或淘汰病畜，目前本病的检疫主要依赖补反和反常反应。本文建立了牛副结▓核病ELISA诊断方法。
一、材料与试剂
1、副结核分枝杆菌亲和〓层析抗原
2、草分枝杆菌吸收抗原
3、兔抗牛IgG酶标抗体
4、牛副结核病参考阳性Ψ血清
5、牛副结核病参考阴性血清
1～5项均由指定单位ζ 供应。
6、器材 ELISA板， 酶联免疫吸附检测仪、加样器、洗瓶、恒温箱等。
7、试剂及溶液配制同第五节猪瘟ELISA.。
二、操作方法
1、抗原包被 以抗原稀释液将副结核亲和层析抗原稀释至50μg/ml,每孔包被0.1ml.部分对照孔以牛血∏清白蛋白(50μg/ml)包被。
2、血清处理 取待检血清、参考阳性血清、参考阴性血清各0.10ml，加生理盐水0.80ml，加草分枝▲杆菌吸收抗原0.10ml，混匀，37℃感作1h.取0.10ml，加血清稀释液0.90ml(注意血清稀↙释液中加牛血清白蛋白，不加犊牛血清)。混匀即可
3、正式试验 按表12-4进行。每个样品加2孔，以求OD平均值。
三、结果判定
在对照组【成立的前提下， 即参考阳性血清呈棕黄色，参考阴性血清及其它对照孔呈无色或浅黄色， 判定待测】结果。
1、目测判定 与参考阳性血清孔颜色相当「，即呈棕黄∩色，判为ELISA阳性(+)。
2、酶标仪判定(490nm) 以底物溶液对照孔调零，校正参考阳性血清OD值为1.0(或相应规定值〓)，测定待检孔。当OD≥0.50，判ELISA阳性(+);0.40≤OD≤0.49判ELISA可凝(±);OD<0.40，判ELISA阴性(-)。
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