简介

　　生物体的激酶组是其基因组中的一组蛋白质激酶，这些●蛋白修饰酶是很多治疗领域的潜在靶标。 近年来关于表征人类激酶组的研究和对可用激酶晶体结构的探索导致对激酶作为药物干预潜在靶标的关注日益增加。

　　自从制药行业在 20 世纪 80 年代末开始关注激酶起，研发的大多数激酶抑制剂都以酶的ATP 结合位点为靶〖标。 然而，Gleevec? 的研发为此领域的研究注入了新的活力，该药物是一种酪氨酸激酶抑制剂，可诱导靶标 BCR-Abl 激Ψ 酶发生结构重组。 这引发了关于处理激酶抑♀制的创新♂理念，包括在 ATP 位点外部结合和尝试防止激酶活化。

　　详细的酶动力◤学研究在基于新颖理念表征化合物作用机制中起着不可或缺的作用。 一种具有高价值的方▓法是等温滴定量热法 (ITC)，该方法可提供化合物与靶蛋白结合的完整热力学ぷ资料↓。 使用该方法产生的数据可对比化合物与不同形式的酶结合的亲和力测定，例如游离酶、酶-底物复合物、酶-产物复】合物、活性和≡非活性酶。

　　酶信号传导抑制在肿瘤和炎症领域①是久经考验的疾病治疗方法。 我们已经知道，ITC 可提供信」息确定其他配体是否对酶的生物活性有影响，因此本应用报告主【要阐述了 ITC 如何应用于◤鉴定可赋予这一生物活性的酶的分子间复合物。

　　ITC 概述

　　等温滴定量热法可在一次实验中测定结合作用的很多个特性，包括亲和力 (KD)、配体结■合位点的数量 (n) 以及结合反应的焓 (ΔH)。 该方法↑速度很快，不需要荧光标记，且可用于研究没有催化活性的蛋白质(这些蛋白质因催化活性的缺失□而被排除在酶动力学分析的研究之外)。

　　ITC 实验通常涉及在恒定温度下对靶︻蛋白滴定实验化合物，使用 ITC 仪器测定结合活动期间释放或吸收的热量。 在针对蛋白激酶的药物研发期间可以多种途径使用此方法。

　　其中包括：

　　蛋白质结构表□　征和制备，不仅仅是模型配体正确的亲和力方面，还包括正确的化学计∑　量，从而帮助评估功能蛋白质的量，而无需催化活性;分析评价;鉴定可赋予生物活◣性的分子间复合物，ITC 可提供信★息来确定其他配体是否会对试验化合物的生物活性产生⊙影响，这正是本应用报告●关注的焦点。

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　　http://www.malvern.com.cn/support/resource-center/application-notes/AN140630RevealKinaseInhibitorITC.aspx

　　激酶抑制剂机制解密：ITC 引领方向.pdf