人糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)elisa试剂盒说明书 广锐生物-国内高、优Elisa试剂盒供应商本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)水平。用纯化的人糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)，再与HRP 标记的糖∏化血红蛋白A1c(GHbA1c)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色▲。颜色的深浅和样品中的糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48 孔配置96 孔配置保存说明书1 份1 份封板膜2 片（48） 2 片（96）密封袋1 个1 个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准↓品：2700nmol/L 0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存酶标试↓剂3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存样品稀释液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存显色剂A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存显色剂B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存终止液3ml×1 瓶6ml×1 瓶2-8℃保存浓々缩洗涤液（20ml×20 倍）×1 瓶（20ml×30 倍）×1 瓶2-8℃保存样本处理∞及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20 分钟，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出①现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程☉中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌☉管收集，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟2左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定∩量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻∩保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。操作步骤1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第ζ三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔①中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800nmol/L，1200nmol/L ，600nmol/L，300nmol/L，150nmol/L）。2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30（48T 的20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的20 倍）倍稀释后备用。5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。注意事项：1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪∞加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6． 底物请避光保存。7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。39． 本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.95 以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：100nmol/L -2400nmol/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月