近些年来,免疫学分析方法发ξ展很快,特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技↘术以后,使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。ELISA试剂盒有着高特异性、灵敏性等优点,接触ELISA实验》的科研检测员也越来越多,那么ELISA新手操作实验之前需要做哪些准备?
①标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意低『温保存。
②备好所有实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等。
③根据检测标本数量确定所需试剂的量。
④按说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂。
⑤ 选择抗体时最好选择一个单抗和一个多抗进行配对;若选择两个单抗,必须识别︽不同表位的抗体;最好从同一家公司选择抗体对。
⑥ ELISA实验中为了确定最佳信号和最低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相◥抗的滴定。同时,应包括在适当范围内的标准品的系「列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
⑦一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用≡标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在▅一定范围内提高灵敏度。
⑧若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
⑨标准》品的配制:对于每种细胞因子应仔细阅读说明书,注意每批的细节。在使用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节,将冻干〒的细胞因子复溶。
上海恒№远试剂盒优点:
1. 性价比高:高质量,低价格。
2. 高效灵活:多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。
3. 特异性强:优选高度特异的配对抗体。
4. 操作简单:96孔预包被板的完整试剂,实验』时间短。
相关ELISA实验的准备,除了以上说明的之外,上海恒远生物公司建议大家仔细阅读说明书,并确定试剂盒在有效期内容,按说明书确定所♂有试剂齐全(数量、体积)。