大家知道，ELISA试剂盒具有超高的灵敏性，可以达到理想的检测范围。而新◢手在做实验的过程中也难免会遇到各种各样的问题，尤其是刚入手的学生，下面就我们就一起来看看上海恒远ELISA操作指南全解析(DIY夹心法)。
选择抗体时最好选择一个单抗和一个多抗进≡行配对;若选择两个单抗，必须识别不同表位的抗体;最好从同一家公司选择抗体对。ELISA实验中为了确定最佳信号和最低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地★收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。
一般待测抗≡原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可〓利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。为了优化灵敏度，建议放置一个晚上孵育标准品∑和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。当测定混合液体中的抗原时。
ELISA作用：
1. 将酶催化反应的放大作用和抗原抗体亲和反应的高度专一性、特异性相结合，以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂进行免疫←测试，所以具有很高的灵敏度。
2. 实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对▲其进行定量。
3. 其抗原抗体●反应具有高度的特异性。
4. 为浓缩液，配有稀释液，稀释后直接可用，无需另行配置。
