Elisa试剂盒有着准确性高、灵敏度高、特异性强的诸多优点，深受●广大用户朋友的喜爱。然而，在实验过程中，也需要注意很多问题。对此，冬歌生物工程提醒广大用户，需要遵守一些规则，才能更好地进行实验，取得较好的实验成果。

　　Elisa方法被广泛应用于各种抗□　原和抗体测定。在Elisa测定中影响因素较多，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：标本因素;试剂因素;操作因素。

　　冬歌生物◆提示广大用户，在Ψ 进行实验的过程中，需要注意以下的一些问题。

　　1.样品稀释

　　一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定，以※保证试验的灵敏度和特异性。酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会¤产生很强的非特异性反应，出现假阳性。

　　2.试剂盒平衡

　　Elisa中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃)，一般需在室温放置■20～30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不『够，样品孵育时间相对缩短，ELISA反应不够充分。冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。

　　3.样品和试剂的混匀

　　在稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇≡匀，以保证试验的█均一性。

　　4.加样

　　加样是一项很重要的步骤。加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的▼准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。

　　5.温育

　　温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体〖的结合反应在固相上进行，要使液相中⊙的抗原或抗体与固相上的特异抗←体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。

　　6.洗板

　　固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗◣体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异性。洗液尽量不要溢出孔外;加洗液后要静置1分钟，甩去板孔中洗液ぷ后，一定要大◣力拍干;及时更换吸水纸，尤其是拍过酶标记物的吸水纸╳一定要弃去，否则可能影响试验结果。

　　7.显色

　　显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说，显色时间过◣短，结果偏低;显色时间√过长，空白增高ζ或者非特异性显色增加。

　　8.比色

　　比色要注意波长的选择。以TMB为底物和以OPD为底物的试剂≡盒均有使用，而前者比◤色波长为450nm，后者为492nm，滤光片需根据要求随时更换。因此，容易出现滤光片↘错用的问题。