(一)原理
混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞则通过尼龙毛柱，这是获得富含T细胞群的有效方法。
(二)材料及试剂
1.尼龙毛(Femwall Laboratories,LP-1 Leukoqak leukocyte Filters)。
3.装填尼龙毛柱，一次性注射器。
4.取自然沉降的上层血浆，过聚蔗糖—泛影葡胺分层液后，获取的血浆和分层液之间︽的单个核细胞层。
(三)操作方法
1.尼龙毛的清洗与干燥
(1)戴上已经洗去☆滑石粉的一次性手套，将尼龙毛(1包或2包，每包35g)放入烧杯中，加入蒸馏水或去离子水，用铝箔盖上烧杯并煮沸约10min。
(2)冷却至常温，倒入漏斗内，使水滴干。
(3)重复(1)、(2)步骤6次。
(4)将尼龙毛摊在铺有纱布的方盘内，37℃温箱干燥2～3天后，贮藏在带盖的方盘内。
2.装尼〗龙毛柱
(1)取50ml玻璃注射器，拔去注射芯，在注射器头上套一段带夹子的胶管。
(2)将尼龙毛梳理，并适当折叠，以适应注射器的直径♂，填入注射器内，约20ml的体积。
(3)将填好尼龙毛的注射器连同注射器芯一起包好，高压灭菌。
3.细胞分离
(1)将注射器固定在支架上，倒入37℃的细胞培养液，关闭阀门一定时间，然后打开阀门，放掉细胞培养液，以清洗几次尼ぷ龙毛，关上阀门。
(2)将要分离的细胞液用预先加温的培养液稀释成适当的浓度，约5.00×107个细胞/ml。
(3)将细胞液倒入注射器内，使之没过尼龙毛柱→。盖上注射器，37℃温育45min
至1h。
(4)打开下口，缓慢放流(1滴/min)，收集于离心管中。
(5)离心，即获所需的T淋巴细胞。
(6)关闭注射器下口，于注射器内加入0.85%冰冷生理盐水，振荡，并套上注射器芯，打开下口，使劲推出注射器内液体，即获得」粘附于尼龙毛上的B淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞等。
(四)注意事项
1.此种分离法，T淋巴细胞也常有一部分被吸附，吸附的多少与尼龙毛的质量有关，与装柱的松紧也有关系。
2.此法的T淋巴细胞的回收率约20%～30%。
3.用过的尼龙毛可回收，以盐水洗涤，然后浸入0.1Mol/L的HCl中过夜，然后再■同前法清洗
