人8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。药品名称：通用名：人8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)酶联免疫分析试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)水平。用纯化的人8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)抗★体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中⊙依次加入8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)再与HRP标记的8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深∞浅和样品中的8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)呈正相关。用酶标①仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)浓度。 试剂盒组≡成 1 20倍浓缩洗涤液 30ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（90ng/L） 0.5ml×1瓶3 酶♀标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释〓液 1.5ml×1瓶4 样品〗稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实Ψ验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融∴2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释与加样：在酶标包⊙被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品㊣100μl，然后在第【一、第二孔中╱加标准品稀释液50μl，混匀；然后》从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第¤四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五〒、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释№液50ul，混匀；混匀后从⌒　第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第＠ 七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第☆十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各∏取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都╱为50μl，浓度分别为60ng/L，40ng/L ，20ng/L，10ng/L， 5ng/L）。2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相ω同）、待测样◆品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触↘及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后ω　置37℃温育30分钟。 4. 配液：将20倍浓缩洗涤液∏用蒸馏水20倍稀『释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔※除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔▲先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混◎匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以】内进行。计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐〓标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘」以稀释倍数；或用标准物的浓々度与OD值计算出标准曲线的直线回←归方程式，将样品的OD值代◤入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1．试剂盒从冷藏环ξ　境中取出应在室温平衡15-30分钟后方●可使用，酶标█包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能╲会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准△确性，以避免试◇验误差。一次〒加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量ㄨ多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标︼本中待测物质含量过高（样本OD值ξ　大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释□　一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定◣必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不◆得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。检测范围：3ng/L -70ng/L规格：96人份/盒保存条件及有效期1．试剂盒保◢存：；2-8℃。2．有效期：6个月