1.基本操作步骤
(1)安装紫外防护罩。
(2)打开高压汞灯的电源控制箱开关。
(3)插入挡光板，中断光路。
(4)预热5—10分钟。
(5)将载有样品的载玻片放到载物台上。
(6)选择接物镜(按照↙先低倍，后高倍顺ζ序)。
(7)旋转分光镜组件转盘，选择所需要的分光镜组件：“O”为观察透射光时用;“WU”为观察蓝色荧光时用(如DAPl);“WB”为观察绿色荧光时用(如FITC);“WG"为观察红□ 色荧光时用(如TRITC)。
(8)使用阻断滤片(目前多数阻断滤片内置于荧光显微镜)。
(9)通过粗、细螺旋调整焦距。
(10)打开与显微镜连接的计算机，点击数码成像系统软件，采◣集数码图像。
2.注意事项
(1)因观察荧光使用的光源为高压汞灯，其中发出的光含紫外光，对人眼有损害作用，故必须安』装紫外防护罩。
(2)为延长汞灯寿命，打开汞灯后不可立即关闭，以免水银蒸发不完∴全而损坏电极，一般需要等15分钟后才能关闭。
(3)汞¤灯熄灭后待完全冷却才能重新启动，否则灯内汞蒸气尚未恢复到液态，内阻极小，再次施加电压，会引起短路，导致汞︽灯爆炸。这样不仅损坏电器，更重要的是汞蒸√气溢出，将导致工作室污染。故关闭汞灯之后，不能马上再次打开，必须等待至少30分钟。
(4)高压汞灯工作时会散发大量的热量，因此，工作环境温度不宜太高，必须有良⌒ 好的散热条件。
(5)汞灯的使用寿命约200—300小时，在电源控制箱上有时间累计计数器，使用者要记录累◥计小时数，达到300小时，需更换新灯泡，否则亮度不够，影响观察。
(1)载玻片：载玻片厚度应在0.8—1.2mm之间，玻片太厚吸收光多，激发光难∑ 以在标本上聚集。载玻片▼必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。有时需用石英玻璃▓载玻片。
(2)盖玻片：盖玻片厚度应约0.17mm，光洁。为加强激╲发光，也可用干涉盖玻片，这种特制盖玻片的表面镀有若干层对不同波长的光起不同干涉作用〗的物质(如氟化镁)，它可以使荧光顺利通过而反射激发光，这种反射▼的激发光可激发标本中的荧光。
(3)标本：组织切片或其他标本不能太厚㊣，一般以5～20pm为宜，切片太厚可使激发光大部分消耗在标本下部，而物镜直接观察的标本上部不能被激发。切片折叠或杂质过多均可影响荧光的观察。
(4)封片剂：封片剂必№须无自发荧光、五色透明。加上抗淬灭剂后再用指甲油(实际操作中体会指甲油封片效果很好，可做到薄而均】匀)将盖玻片四周封固，既保持盖玻片不滑动，又能防止抗淬灭剂蒸发。在没有抗淬灭剂的情况下，也可使用含30%甘油的PBS，还可用甘◎油与0.5mol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.0～9.5)等量混合液作封片剂。
(5)镜头的⊙清洁】：在油镜使用完毕※后，需用擦镜纸沾上无水乙醇或3：7的醇醚混合液轻轻擦拭。
(6)及时观察：标本染色后应及时观︾察，因时间过长荧光会逐渐减弱。若标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间。
