小鼠瘦素(LEP)elisa试剂盒使用说明书Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置标准品稀释液：1.5ml×1瓶酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）【小鼠瘦素(LEP)试剂盒】本试剂仅供研究使用 计算：以标准物的①浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计☆算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程】式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。试剂盒组成：封板膜:2片（48）/2片（96） 说明书:1份 密封袋:1个标准品： 2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标包被▽板: 1×48 1×96 2-8℃保存样○品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存终止液: 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存实验原理：本试剂盒应用◤双抗体夹心法测定标本【中小鼠瘦素(LEP)水平。用纯化的小鼠瘦素(LEP)抗◆体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入瘦素(LEP)，再与HRP标记的瘦素(LEP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化ㄨ下转化成蓝色※，并◤在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素(LEP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠瘦素(LEP)浓度。目的：本试剂盒用于测定小鼠血←清，血浆及相关液体样▓本中瘦素(LEP)的含量。服务承诺： 供货期：款到发货。工作时间内免费的技术▆咨询和指导 。请〇来电咨询为客户提供来样检测服务，最大限度实验结果的卐有效性(免费代测)。保存条件及有效期■：试剂盒保存：2-8℃| 有效期：6个月 【小鼠瘦素(LEP)试剂盒】样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如∑　出现沉淀，应再△次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有▲沉淀形成，应该再次↓离心。3. 尿液：用无★菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形◥成，应再次ㄨ离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无□　菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细『胞内的成份时〖，用PBS（PH7.2-7.4）稀释◎细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离¤心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入『一定量的】PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检∮测，其余冷冻○备用。6. 标本采集后尽早进行々提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免【反复冻融.7. 不能检◥测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀√释与加样：在酶标包被板上♀设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔◥中各取100μl分别加※到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各▆取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀■后从第七、第八〇孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。2. 加样：分别设空白ㄨ孔（空白对照孔不加样品及酶标№试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测＠ 样品10μl（样品最终ω　稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板↓孔底部，尽量不触及孔∏壁，轻轻晃动混♂匀。3. 温育：用封板膜封板后▲置37℃温育30分钟。4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入◎酶标试剂50μl，空白孔』除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色︻立转黄色）。11. 测定：以︾空白空调零，450nm波长依序测★量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在∑加终止液后15分钟＠以内进行。【小鼠瘦素(LEP)试剂盒】注意事项：1． 试剂盒从冷藏环『境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀々释时可在水浴中加温助溶，洗∮涤时不影响结果。3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数◥量多，推荐使用排枪≡加样。4． 请每次测定ζ　的同时做标准曲线，最好做复♀孔。如〓标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉々污染。6． 底物请避光≡保存。7． 严格按照说明书的◥操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9． 本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文←说明书为准。试剂⊙盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2.批内与批〇见应分别小于9%和11%检测范围：0.2IU/L - 6IU/L