1. 电泳缓冲液pH值太高:硅胶膜在〓高盐及低pH值(pH≤7.5)时可结合DNA,在低盐及高pH值(pH≥8)条件下洗@ 脱。如果电泳缓冲液pH值太高,会导致DNA无法结合或降低结合率。可在溶胶后加入 10μl KAc(pH5.0),将pH值调至7.5以下。
2 回收的胶块太大(>400 mg):如果需要处理的胶▓块太大,应◢先将其切成小块,做两次回收或选用大量型回收试剂盒。
3. 胶块未全部溶解:溶解凝胶时应置于55℃水浴,不断上下颠倒,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤。
4. 漂洗液中未加无水乙醇↑:第一次使用前︻应在漂洗液中加入无水乙醇。漂ζ洗液每次用后应拧紧瓶盖,以免乙醇挥发,降低回收率。
5. 洗脱缓冲液不合适:DNA只※在低盐溶液中才能被洗脱,如洗脱缓冲液〇EB (10 mM Tris·Cl, pH8.5)或水。洗脱效率取♂决于pH值。最大洗脱效率在pH 7.0-8.5间。当用水洗脱时确保其pH值在此范围内。
6. 洗脱缓冲液未加在离心柱中间尤其使用较少量洗脱∏缓冲液时,应加在离心柱正中间■,并放置1-2分钟,再离心。
7. 加入异丙醇后产生雾状和▂凝胶状沉淀。这种现象可能是※盐沉淀,颠倒混合样品沉淀就会消失。 或者是胶块没有完全溶解,此时可将混合物加入离心柱,离心,在离心柱中▲再加入0.5 ml 溶胶液↙室温放置1min,离心即可出去剩余琼脂糖凝ㄨ胶。